多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用(（共4篇））由网友“ecitsuJ”投稿提供，以下是小编精心整理的多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用，供大家参考借鉴，希望可以帮助到有需要的朋友。
篇1：多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用
多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用
目的: 构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库.方法: 从正常人外周血中分离淋巴细胞, 以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因, 以重叠延伸PCR将VH、 VL组装成scFv基因, 并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中.以pCANTAB-5E电转化大肠杆菌TG1, 构建人源天然噬菌体抗体库, 测序分析抗体基因的家族信息和多样性, 并用多种抗原对其进行筛选.结果: 获得了库容为2×108的人源天然噬菌体抗体库.分别用5种抗原对其进行筛选, 均可获得特异性噬菌体抗体的富集.结论: 成功地构建了一个多样性良好的`人源天然噬菌体抗体库, 可用于制备具有应用前景的人源抗体.
作 者：王晋 罗文新 李利峰 陈瑛炜 王明桥 张军 夏宁邵 WANG Jin LUO Wen-xin LI Li-feng CHEN Ying-wei WANG Ming-qiao ZHANG Jun XIA Ning-shao 作者单位：厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室,福建省医学分子病毒学研究中心,福建,厦门,361005 刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(6) 分类号：Q782 关键词：人源天然噬菌体抗体库 单链抗体 多样性篇2：全合成人源性噬菌体抗体库的构建
全合成人源性噬菌体抗体库的构建
目的:构建全合成人源性噬菌体抗体库.方法:选择部分使用频率较高的人抗体胚系基因家族的框架区基因进行人工合成,同时人工设计合成半随机CDR3,通过重叠拼接延伸PCR的方法合成抗体基因.然后利用限制性内切酶SfiⅠ、NotⅠ分别双酶切抗体基因和噬菌体展示载体.连接后的重组噬粒通过电击转化的`方法转入大肠杆菌TG1,构建抗体库.结果与结论:PCR结果显示,通过优化后的方法能在保证抗体库多样性的前提下,高效地获得抗体基因.经过数十次电击转化构建了库容量为2×109的全合成抗体库,菌落PCR、测序及筛选结果表明,抗体库质量优良,为筛选人源性治疗抗体奠定了基础.
作 者：杜威世 王双 孙志伟 俞炜源 DU Wei-Shi WANG-Shuang SUN Zhi-Wei YU Wei-Yuan 作者单位：军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 刊 名：军事医学科学院院刊 ISTIC PKU英文刊名：BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES 年，卷(期)：2006 30(4) 分类号：Q782 关键词：噬菌体展示 全合成抗体库 单链抗体篇3：噬菌体抗体库固相筛选条件的初步研究
噬菌体抗体库固相筛选条件的初步研究
目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的`设计提供实验依据.方法:利用多种针对HEV NE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的条件进行初步探索.结果:阳性噬菌体抗体与抗原反应1 min,就可较好结合,洗涤次数为20～30次、洗涤液的pH为5时,筛选得到的阳性率最高.包被抗原的浓度对筛选的阳性率没有明显影响,用10 mg/L抗原竞争洗脱60 min,可得到较高的阳性率.结论:噬菌体抗体库的筛选是一个非常复杂的过程,其中的各个条件之间有着密切的联系,应该根据具体情况进行调整.
作 者：王明桥 罗文新 陈瑛炜 袁权 王晋 张军 夏宁邵 WANG Ming-qiao LUO Wen-xin CHEN Ying-wei YUAN Quan WANG Jin ZHANG Jun XIA Ning-shao 作者单位：福建省医学分子病毒学研究中心,厦门大学教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室,福建,厦门,361005 刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(5) 分类号：Q782 关键词：噬菌体抗体库 固相筛选 筛选条件篇4：人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv抗体片段基因的构建与表达
人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv抗体片段基因的构建与表达
目的构建人源抗狂犬病毒二硫键稳定性Fv(dsFv)抗体基因,并在原核系统中实现高效表达,制备有活性的人源抗狂犬病毒dsFv抗体片段.方法采用PCR定点突变的方法,构建抗狂犬病毒dsFv抗体的重、轻链(VH、VL)突变基因,Nde Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后分别插入pET-22b(+)表达质粒中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.将VL、VH包涵体蛋白经盐酸胍变性,按比例混合在复性折叠缓冲液中,使二者折叠形成dsFv抗体片段.并以其母本抗体scFv作对照,对其抗原特异性和稳定性进行初步评价.结果在VH的第44位氨基酸和VL的第100位氨基酸引入了半胱氨酸,成功构建了抗狂犬病毒dsFv抗体基因,并在原核系统中实现了对二者的高效表达,VH、VL蛋白在复性缓冲液中正确折叠形成了dsFv抗体片段.结论对筛选获得的.抗狂犬病毒scFv成功进行了稳定性改构,制备了有活性的dsFv抗体片段,改构以后的dsFv保持了对狂犬病毒的特异结合活性,而其在血清中的稳定性有明显改进,而且其热稳定性和抵抗尿素化学变性的能力亦大大改进.
作 者：赵小玲 荫俊 陈伟强 杨冠 张素娟 作者单位：赵小玲(100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所;天津军事医学科学院卫生学环境医学研究所)荫俊(100071,北京,军事医学科学院微生物流行病研究所)
陈伟强(天津军事医学科学院卫生学环境医学研究所)
杨冠(军事医学科学院生物工程研究所)
张素娟(解放军第254医院)
刊 名：解放军医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY 年，卷(期)：2006 31(2) 分类号：Q78 关键词：狂犬病病毒 二硫键稳定性Fv抗体 基因表达★ 生物技术自荐信
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