绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析（集锦7篇）由网友“噫咕哔咕”投稿提供，以下是小编收集整理的绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析，仅供参考，希望对大家有所帮助。
篇1：绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析
绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析
利用DNA重组技术,将绵羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrPc插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得的表达产物为绵羊朊蛋白OvPrP(23～256).经SDS-PAGE分析,表达产物以包涵体形式存在.将包涵体蛋白用8 mol/L尿素溶解,在变性条件下经Ni-NTA柱亲和层析纯化,而镍柱能竞争性结合含有6×His标签的pET30a表达的.目的蛋白.由于目的蛋白是在变性条件下纯化的,需要将其复性后才能恢复天然构象.采用梯度尿素透析复性后,复性率为25%左右.为了进行重组朊蛋白的结构分析,将重组蛋白进行超滤浓缩,至蛋白浓度为0.4 mg/mL时,采用远紫外线圆二色谱(CD)分析其二级结构,并对其高级结构进行了预测.结果表明:通过Western-blotting鉴定,表达的绵羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23～256)的分子量为25172.80 u左右.经过Jascow32软件分析后,测得OvPrP(23～256)的二级结构含量为:α螺旋为39.4%,β折叠为0%,转角为0%,无规卷曲为60.6%.绵羊重组朊蛋白高级结构的分析为朊病毒疾病的发生机理的探讨提供科学依据.
作 者：刘美丽 赵德明 周向梅 尹小敏 LIU Mei-li ZHAO De-ming ZHOU Xiang-mei YIN Xiao-min 作者单位：中国农业大学,国家动物海绵状脑病实验室,北京,100094 刊 名：中国预防兽医学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 28(6) 分类号：Q78 关键词：绵羊朊病毒蛋白 原核表达 圆二色谱 结构分析篇2：人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定
人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定
目的 构建人His标记的γ干扰素诱导蛋白10 (interferon-γ-inducible protein 10, IP-10)融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达、纯化,获得有活性的IP-10蛋白,为进一步研究其在炎症过程中的作用机制及寻找新的抗炎途径提供基础.方法 从人肺cDNA文库中PCR扩增无信号肽的`IP-10基因编码序列,构建重组载体pET-14b/IP-10;重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株;经异丙基γ-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导后,用镍离子亲和层析柱纯化融合蛋白,以THP-1细胞进行微室跨膜迁移(transwell)实验鉴定融合蛋白活性.结果 酶切、测序鉴定重组载体pET-14b/IP-10构建正确,并纯化得到高纯度的IP-10融合蛋白.而且该蛋白具有诱导单核细胞THP-1跨膜迁移活性.结论 成功构建了人IP-10融合蛋白表达载体,并纯化得到具有活性的IP-10融合蛋白,为进一步研究IP-10的功能提供了重要的实验材料.
作 者：邵紫韫 彭毅 SHAO Zi-yun PENG Yi 作者单位：邵紫韫,SHAO Zi-yun(广州军区武汉总医院医务部,武汉,430070)彭毅,PENG Yi(广州军区武汉总医院心血管内科)
刊 名：华南国防医学杂志 ISTIC英文刊名：MILITARY MEDICAL JOURNAL OF SOUTH CHINA 年，卷(期)： 22(4) 分类号：Q78 关键词：γ干扰素诱导蛋白10 融合蛋白 细胞迁移篇3：TRAIL蛋白原核表达载体的构建及表达研究
TRAIL蛋白原核表达载体的构建及表达研究
目的 利用蛋白自剪切功能原核表达系统构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胞膜外段融合蛋白表达载体,并进行表达条件优化和初步纯化.方法 设计基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的'TRAIL基因与经相同处理的载体pTWIN1相连接,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子.将鉴定(酶切及序列分析)阳性的重组子质粒转入大肠埃希菌ER2566表达菌中, 采用蛋白质SDS-PAGE 电泳方法 分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG) 、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白表达情况.结果 成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列,酶切及序列分析证实成功构建了TRAIL胞膜外段蛋白自剪切功能原核表达载体.采用0.3 mmol/L IPTG、15 ℃诱导过夜(14～16 h),目的蛋白获得较高表达量,且大部分为可溶性蛋白.结论 采用大肠埃希氏菌ER2566,TRAIL胞膜外段融合蛋白获得高表达,经简单后续处理即可获得不含任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白.
作 者：杨文理 陈守春 陈毅荣 覃扬 YANG Wen-li CHEN Shou-chun CHEN Yi-rong QIN Yang 作者单位：杨文理,覃扬,YANG Wen-li,QIN Yang(四川大学华西基础医学与法医学院,生物化学与分子生物学教研室,成都,610041)陈守春,陈毅荣,CHEN Shou-chun,CHEN Yi-rong(地奥集团新药研究所)
刊 名：四川大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 37(5) 分类号：Q5 关键词：肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 蛋白内含子 原核表达篇4：人朊蛋白基因的克隆与原核表达
人朊蛋白基因的克隆与原核表达
以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein, PrP)基因Prnp的.开放阅读框(ORF),与pMD-18T载体连接后转入E.coli JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99.6 %,推导的氨基酸序列同源性为99.8 %.将编码人成熟PrP的基因定向克隆到pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化E.coli BL21(DE3),在37 ℃下用1.0 mmol/L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20 %～25 %.用Ni-NTA树脂亲和层析纯化了表达产物.Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别.因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原.
作 者：姜海霞 刘永生 杨孝朴 陈豪泰 朱小玲 张杰 谢庆阁 JIANG Hai-xia LIU Yong-sheng YANG Xiao-pu CHEN Hao-tai ZHU Xiao-ling ZHANG Jie XIE Qing-ge 作者单位：姜海霞,朱小玲,JIANG Hai-xia,ZHU Xiao-ling(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046)刘永生,陈豪泰,张杰,谢庆阁,LIU Yong-sheng,CHEN Hao-tai,ZHANG Jie,XIE Qing-ge(中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046)
杨孝朴,YANG Xiao-pu(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070)
刊 名：甘肃农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 41(3) 分类号：Q785 Q786 关键词：人 朊蛋白基因 克隆 原核表达篇5：蜘蛛丝蛋白的模块结构性能和重组表达
蜘蛛丝蛋白的模块结构性能和重组表达
蜘蛛丝是一类天然蛋白质纤维,具有独特的机械性能(高强度、高弹性和高断裂功等)和卓著的生物学特性(生物可降解性和与生物组织的相容性等),在生物医学、材料、纺织和军事等领域都有着很高的潜在应用价值.综述了不同蜘蛛丝蛋白的.模块结构特征及与其功能的关系,扼要介绍了目前利用各种基因工程方法表达重组蜘蛛丝蛋白的研究进展.
作 者：周培 邹竹荣 曹丽娟 苏裕 ZHOU Pei ZOU Zhu-Rong CA Li-Juan SU Yu 作者单位：华东师范大学,生命科学学院,上海,62 刊 名：生物技术通讯 ISTIC英文刊名：LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 19(4) 分类号：Q51 Q78 关键词：蜘蛛丝蛋白 分子模块 结构和功能 重组表达篇6：《桃花源记》主旨与结构分析
《桃花源记》可分为三部分。第一部分，从首句至“欲穷其林”，写武陵渔人捕鱼时偶然进入桃花源的曲折情景。作者以惊人的妙笔，描绘了桃源恬静、优美的自然环境：长长的绿水，夹岸的桃林，纷飞的花瓣，芬芳的嫩草，使人赏心悦目，心旷神怡。作品一开始就以特有的魅力紧紧抓住了读者，使你非跟着渔人这个导游走下去不可。第二部分，从“林尽水源”至“不足为外人道也”，写渔人所见的桃源风光及农民古朴淳真、热情好客的生活情趣。作者借人民不满秦始皇暴政这一历史事实来抒发对刘裕弑君篡位暴行的不满，并由此产生对理想境界的热烈追求，以大胆的幻想、饱满的浪漫主义情绪歌颂了理想乐土。这是“记”中的主体和核心。作者是通过形象的描写，神话式的虚构故事和美的激情来打动读者心灵的。第三部分，从“既出”至末句，写渔人离开桃源后，数人闻讯再访而不可得其路径的种种情景。以此作结，给读者留下了悬念，增加了作品幽微神秘的色彩。这结尾，也可能是暗示读者：这美好的境界在现实中是并不存在的。
词句知识
1.“然”字的用法
“然”，在古汉语中，附在描写声容情态的词语之后，作为构词的辅助成分，与现代汉语的“地”相当。作“……的样子”讲(有时可不翻译)。
“豁然开朗”中的“豁然”，是“开阔、敞亮的样子”的意思。
“屋舍俨然”中的“俨然”，是“整齐的样子”的意思(“俨然”在现代汉语中还有另一义为“十分象……的样子”，如“俨然一个正人君子”)。
“怡然自乐”中的“怡然”，是“悠闲、安详的样子”的意思。
“欣然规往”中的“欣然”，是“高兴地”“愉快地”的意思。
2.句式的省略在本文中，主要表现为主语、宾语的省略。
(1)省略主语。例如：
山有小口，(小口)仿佛若有光。(武陵人)便舍船，从口入。(小口)初极狭，才通人。(武陵人)复行数十步，豁然开朗。
其中(人们)往来种作，男女衣着，悉如外人。
(村中人)见渔人，乃大惊，问所从来。(渔人)具答之。(村中人)便要还家，设酒杀鸡作食。村中(人)闻有此人，咸来问讯。
(2)省略宾语。例如：
①问(渔人)所从来，便要(渔人)还家。
②此人一一为(之)具言所闻。
③余人各复延(渔人)至其家。
在古汉语中，省略掉主语宾语，并不会导致语意含混、引起误解，反显出语言的简练、紧凑。但在译成现代汉语时，却常常需把省略掉的成分补出来。
3.古今词义的异同
在本文中，重点是理解与区别那些同现代汉语的双音词在文字形式上完全相同而含义不同的词组。例如：
在古汉语中，这类双音词的每一个词素都有独立的意义，翻译时都必须准确地译出。古今义有相同的因素，但更须了解其不同之处，否则容易“以今释古”，造成理解上的偏差或错误。
四、详略安排
本文是作者的寓意之作，因而能否表达寓意，就成了材料取舍的关键。总的说来，桃花源里面写的详，桃花源外面写的略;生活图景写的较详，一般过程较略;渔人进桃花源时写的详，出来时写的略;桃花源中人“自云”写的详，渔人的答话写的略。正因为该详就详，该略就略，详略得当，所以全文仅用320字，就创造了一个有头有尾、有环境、有情节、有人物和有对话的动人故事，完美表达了寓意。
五、虚实结合的写法
作品既具有浓烈的浪漫虚幻色彩，又有强烈的真实感人力量。这一方面是因为主题具有现实意义;另一方面是作者始终注意把虚构与现实结合起来。乌托邦式的理想社会是虚构的，情节是离奇的。桃花源是“避秦时乱”的人们开辟的，一直延续到晋代，与世隔绝五六百年，这当然是不可能的。但是，秦始皇式的暴政，在陶渊明生活的时代依然存在，东晋统治集团对人民的残酷压榨，对下层知识分子的无情排斥，刘裕篡夺皇位的阴谋手段，都是活生生的现实。所以，人们能通过这离奇的构思，强烈地感到主题的真实。同时，作者始终注意在虚构故事时结合着逼真的写实。如文章一开始就明确向读者交待了事件发生的时间、地点及其人物的身份、职业：“晋太元中，武陵人捕鱼为业”，这就使桃源境内发生的一切事情变得好像都是真的。最后写南阳刘子骥向往这个乐土，欣然寻访，没有成功。刘子骥，是历史上实有的人物，是晋朝太元时的名士，与陶渊明是同时代的人，作者把他写进作品中去，就进一步渲染了作品的真真假假的气氛。作者之所以如此首尾照应，意在使人确信：虚幻怪异的桃花源是实有其地的胜境，从而加强了作品诱人的艺术力量。
六、语言艺术特色
作者善于用通俗平易、朴素自然的语言在其田园诗中描写他所喜爱的农村生活。在《桃花源记》中也是如此。如作品的第一段写桃花源外面的'景色：“忽逢桃花林，夹岸数百步，中无杂树，芳草鲜美，落英缤纷。”仅仅用22个字就描画出一幅迷人的暮春桃林图。头两句从正面写桃林之茂密，第三句从反面写桃树之多而且纯，后两句从侧面衬托出桃林地面之美，以及桃花盛开后花瓣纷纷落下的景象。作者从不同的角度描写桃林之美，其中有的词语如“芳草鲜美”，简直给读者一种有色有香的感觉，而所用的语言却是接近口语化的。陶渊明用这些朴素的散文语言描绘了桃源外围及内部的自然美和人们的生活美，因此吸引了后世不少的画家去画桃源图。清人卫炳鋆说：“桃源山水，画中景也。……而古今之列人画谱者，唐、宋以来，惟摩诘《桃花源里人家》，意趣盎然，神致生动。……韩文公《题桃源图》诗，舒元舆有《录桃源画记》，吟咏之余，宛若置身洞天福地，然其造意设色，大约因明记想象为之。”;《古典文学研究资料汇编·陶渊明卷下编》，中华书局1962年版)作者在叙述中的语言不仅到朴素自然，而且非常精练，没有多余的废话。全文用320个字就讲了一个有头有尾，有人物，有话，有情节的故事。整篇作品因主要写桃源社会，所以着重详写桃源内的人与事，写桃源外的事就从略。作者往往用精练的语言表达丰富的内容，收到以少胜多的效果。如写到桃源人初见渔人的情景，只写“见渔人，乃大惊”，后面三个字不仅写出了桃源人见到渔人的神色，而且也体现了他们与外界隔绝之久。又如写渔人与桃源人谈话的情景，作者以“此人—一为具言所闻，皆叹惋”一句话作了交代。这个复句所包含的内容也很多。渔人自己在世上所知道的详细情况，不是作者所要着力描写成的所以在上半句一笔带过。而后半句，虽只三个字，但从桃源人共同的“叹惋”中，可以想象到渔人所说的世上的情形，与桃源内的生活相比之下，世上是多么混乱不堪!而桃源内的生活又是多么安定
《桃花源记》中许多词语由于言简意赅，一直被后世沿用下来，至今还有其生命力。如：“芳草鲜美”，“落英缤纷”，“豁然开朗”，“土地平旷”，“屋舍俨然”，“不足为外人道也”，“乃不知有汉，无论魏晋”等等，这些词语都几乎成了人们熟悉的成语。其中“乃不知有汉，无论魏晋”一句，用来表现桃源人与世外隔绝之久，而又说明桃源内没有朝代变化的情形，非常贴切，又非常生动具体。宋代唐庚在《唐子西文灵》中说：“唐人有诗云：‘山僧不解数甲子，一叶落知天下秋。’及观渊明诗云：虽无纪历志，四时自成岁’，便觉唐人费力如此。如《桃花源记》言：‘乃不知有汉，无论魏晋。’可见造语之简妙。盖晋人工造语，而渊明其尤也。”从上所说，可见宋代人也已看出了陶渊明驾驭语言上的深厚功夫。不言而喻，陶渊明在写作《桃花源记》艺术上的独创之处值得我们研究和借鉴。
拓展阅读：《桃花源记》说课稿
一、说教学目标
《桃花源记》是一篇文质兼美的文章，具有很多特点。首先，故事性强，颇具传奇色彩。其次，作者借虚构的故事表现自己的社会理想，全文笼罩着似有若无的神秘虚构的色彩。另外，浅显易懂，文章的语言优美，琅琅上口，值得品味。把本文的目标定为以下的几点：
(1) 知识目标：感受桃花源的美好情境，结合语境解释词语，品味优美的语言，领会本文的主题。
(2) 能力目标：通过对桃花源美景的描绘，训练学生的朗读能力和想象思维的能力。
(3) 情感目标：了解作者追求理想社会的思想感情，激发学生为追求个人理想而努力学习的兴趣。
教学方法：朗读法、想象法、自主探究法、多媒体课件教学法。
二、说教学过程：
第一课时：使用抄、查、读的方式让学生的自主学习，进一步的熟悉文章。
抄就是将注释抄在字的上头(蓝笔);查就是查阅工具书将理解有困难的字解决掉(红笔);读就是就以上的解释进行全文的翻译。
设计意图：教师放手，养成学生自主学习文言文的习惯。学生成为学习的主人，自然会对下一节课的内容高度关注。符合新课标中阅读浅易文言，能借助注释和工具书理解内容的要求。
第二课时：
(一)导入新课：
用三国两晋时的军阀混战，时局动荡的背景切入，我们要了解的大诗人陶渊明就生活在东晋，他的名篇《桃花源记》也在那个混乱丑恶的时代应运而生。
设计意图：让学生对背景简单认识，暗示他们更好的理解文章须以此为依托。
(二)提出问题：
A说出自己对成语世外桃源的理解
B听读课文，陶渊明笔下的桃源具有怎样的魅力成为众人向往的洞天福地呢?
设计意图：边听录音示范边思考问题能激发学生学习的兴趣，集中学生注意力，使学生更加专注阅读课文，无形中加强对全文进行了整体感知。在这个主问题的之下，师生互动，更容易牵引一些小问题：
(1) 找寻描写自然风光优美和桃源人安居乐业的段落指导朗读。
总结提升朗读效果的方法：
(1)了解内容，准确翻译。
(2)明确作者抒发的情感。体味表达的意境。
(3)、注意节拍、重音、语速。
(2) 对表现桃源另一特点即村民的纯朴善良的语句赏析。结合本节留白部分引导学生进行合理想象。
从景物描写入手。
从人物的语言、动作、神态、心理活动入手。
设计意图：符合新课程教学标准的要求：学习诵读古文，有意识的积累，在感悟和运用中提高学生的欣赏和审美情趣。所以，主问题牵引细碎的小问题更容易让学生推敲朗读方法、结合语境解释词语，训练发散思维。
(三)揭示主题
A找出虚构的痕迹。
B陶渊明为什么没有直揭社会现实，而是虚构了一个理想化、至少
在当时不会有的世外桃源?
学生先说，教师不马上说出答案，将课前学生查找的、老师整理汇总过的资料分发给他们，在其中找到答案，进而概括主题。
设计意图：很多学生查阅资料的能力不是太强，或者说不愿意查，抱着双苹果书不放，那里的介绍并不十分全面，这个设计的目的是让学生应全面了解作者，了解风格、了解他的遭遇，了解他的故事。培养筛选、积累和阅读课外文字的习惯。
篇7：重组SARS冠状病毒S蛋白的原核表达研究
重组SARS冠状病毒S蛋白的原核表达研究
目的 克隆表达SARS冠状病毒的主要结构蛋白(S蛋白).方法 合成SARS冠状病毒S蛋白特异性基因片断并克隆入pET32a原核表达载体,转化BL21菌,经IPTG诱导高效表达得到重组S蛋白,并通过Western印迹对重组蛋白质进行鉴定.结果 重组蛋白质经镍柱亲和层析得到了部分纯化,免疫动物后得到SARS病毒的`多克隆抗体.结论 经E1isa检测,表达的重组S蛋白基本具备检测病人血清中抗SARS病毒IgG和IgM的能力,可进一步用于S蛋白功能研究与SARS诊断试剂盒的研制.
作 者：颜桦 陈功 蒙世杰 陈超 YAN Hua CHEN Gong MENG Shi-Jie CHEN Chao 作者单位：颜桦,陈超,YAN Hua,CHEN Chao(国家微检测系统工程技术研究中心/西北大学生物芯片研发中心/陕西北美基因股份有限公司,陕西,西安,710069;西北大学,生命科学学院,陕西,西安,710069)陈功,CHEN Gong(国家微检测系统工程技术研究中心/西北大学生物芯片研发中心/陕西北美基因股份有限公司,陕西,西安,710069)
蒙世杰,MENG Shi-Jie(西北大学,生命科学学院,陕西,西安,710069)
刊 名：西北大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NORTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 36(5) 分类号：Q5 关键词：严重急性呼吸综合征(SARS) 重组S蛋白 表达 纯化★ 烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达
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