人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测（精选7篇）由网友“餓餓喝水中”投稿提供，下面是小编为大家整理后的人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测，以供大家参考借鉴!
篇1：人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测
人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测
目的:获得大量重组人α防御素(HDα)并检测其活性,为其深入研究提供必要的材料.方法:体外化学合成得到带有羟氨裂解位点编码序列的HDα基因片段,克隆入pBV220-IL-4表达载体构建重组表达载体pBV220-IL-4- HDα.测序正确后将重组质粒转入大肠杆菌DH5α中进行温度诱导表达.经羟氨裂解去除IL-4后,对所得蛋白进行纯化、复性,以SDS-PAGE和生物学活性检测鉴定其特性.结果:经温度诱导后,融合蛋白主要以包涵体的形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的20%;羟氨裂解切除IL-4后,所得目的蛋白的纯度约为99.8%.抑菌活性试验和克隆形成试验显示,所得HDα对细菌生长有明显的`抑制作用.结论:成功地构建了HDα基因的重组表达质粒,获得稳定表达的工程菌,并建立了复性与纯化技术,为进一步对其进行功能研究与应用奠定了基础.
作 者：傅海燕 张剑 路凡 蒲勤 王孝功 卢兹凡 徐俊卿 赵忠良 FU Hai-yan ZHANG Jian LU Fan PU Qin WANG Xiao-gong LU Zi-fan XU Jun-qing ZHAO Zhong-liang 作者单位：傅海燕,张剑,路凡,蒲勤,王孝功,卢兹凡,赵忠良,FU Hai-yan,ZHANG Jian,LU Fan,PU Qin,WANG Xiao-gong,LU Zi-fan,ZHAO Zhong-liang(第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710032)徐俊卿,XU Jun-qing(第四军医大学西京医院放射科,陕西,西安,710032)
刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(2) 分类号：Q786 关键词：人α防御素(HDα) 表达 纯化 生物学活性 检测篇2：sTNFR Ⅱ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测
sTNFR Ⅱ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测
可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFRⅡ)和血管活性肠肽(VIP)对类风湿性关节炎(RA)均有治疗作用,但两者的作用机制不同.制备两者融合蛋白,可能具有更好的防治类风湿关节炎的`作用.用含有VIP基因序列的上游引物和sTNFRⅡ的下游引物,用PCR扩增出由连接序列将VIP和sTNFRⅡ基因连接的片段,再亚克隆到原核表达载体pET32a,在大肠杆菌DH5α内诱导表达.表达的产物经离子交换、疏水层析纯化,并用体外中和试验检测其抑制TNF细胞毒及肝细胞膜特异性脂蛋白(Lsp)诱导的细胞毒生物活性.结果显示构建的pET32a-VIP-sTNFRⅡ表达载体在大肠杆菌DH5α内以包涵体形式表达,疏水层析结合离子交换层析纯化后,融合蛋白具有较好的抑制炎症分子诱导的炎症反应生物活性,为将来应用打下基础.
作 者：王虹 曾位森 陈金华 王珊珊 刘丹 杨艳妮 陈百宏 李玲 WANG Hong ZENG Wei-sen CHEN Jin-hua WANG Shan-shan LIU Dan YANG Yan-ni CHEN Bai-hong Li Ling 作者单位：广州蓝星生物科技开发有限公司,广州,510663 刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 26(5) 分类号：Q78 关键词：sTNFRⅡ VIP 融合蛋白 表达 纯化篇3：重组人PD-1IgV融合蛋白的克隆、表达、纯化及生物学活性检测
重组人PD-1IgV融合蛋白的克隆、表达、纯化及生物学活性检测
目的:获得具有生物学活性的'重组人PD-1IgV(rhPD-1IgV)蛋白.方法:人工合成PD-1IgV基因,并将该基因克隆入原核表达载体pQE-30中.转化宿主细胞大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达重组融合rhPD-1IgV蛋白.对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析.结果:rhPD-1IgV的Mr约为15×103,与根据其氨基酸组成计算的理论值一致.成功纯化了rhPD-1IgV蛋白,并对其进行了复性和浓缩,且复性后的蛋白可与其配体B7-H1结合,显示出良好的结合活性.结论:成功地克隆、表达和纯化了rhPD-1IgV蛋白.
作 者：王伟华 张英起 颜真 WANG Wei-Hua ZHANG Ying-Qi YAN Zhen 作者单位：第四军医大学药学系生物技术中心,陕西,西安,710033 刊 名：第四军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 27(5) 分类号：Q78 关键词：PD-1IgV 重组融合蛋白 纯化 复性 pQE-30载体篇4：鼠防御素基因Crp4在大肠杆菌中的表达及活性检测
鼠防御素基因Crp4在大肠杆菌中的表达及活性检测
通过基因工程技术,以鼠防御素基因Crp4为研究对象,从鼠回肠末端克隆了鼠防御素Crp4基因的成熟编码序列(约为102 bp),将其与另外2个鼠防御素基因的氨基酸序列进行比对,发现同源性分别高达97.8%和97.1%.将该序列克隆到原核表达载体pET-28a中,构建了重组质粒pET-Crp4,转化DE3感受态并用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE和Wersiernblot结果表明,该基因在pET-28a中成功表达.体外抑菌试验证实,重组Crp4蛋白对金黄色葡萄球菌、李斯特菌、大肠杆菌等具有一定的.抑菌活性.
作 者：陈宝玉 宋德光 宋斯伟 查云峰 邓旭明 曾凡勤 作者单位：陈宝玉,宋德光,宋斯伟,邓旭明,曾凡勤(吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062)查云峰(广东省动物防疫监督总所,广州,510230)
刊 名：吉林农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF JILIN AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 28(5) 分类号：Q786 S852.61 关键词：防御素 Crp4 大肠杆菌 原核表达 生物学活性篇5：颗粒溶素的表达纯化及生物学活性分析
颗粒溶素的表达纯化及生物学活性分析
目的:采用原核表达系统对颗粒溶素(granulysin,GNLY)进行体外表达,纯化及活性鉴定.方法:以体外培养的`人外周血单个核细胞(PBMC)为模板,RT-PCR扩增编码GNLY的cDNA片段,插入pMD-18-T 载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET28a(+) 中,构建重组表达质粒pET28a(+)-GNLY,转化大肠杆菌BL21(DE3) plysS,IPTG诱导表达融合蛋白,包涵体经变复性后用Ni亲和层析纯化,CFU法测定蛋白活性.结果:成功地将GNLY cDNA片段插入载体pET28a(+)中,构建了表达质粒pET28a(+)-GNLY.经诱导在原核表达系统中以包涵体形式高效表达了相对分子质量为9 000的融合蛋白,变复性纯化后的GNLY蛋白经CFU法检测,发现其具有细胞毒活性且细胞毒作用具有剂量依赖性.结论:本实验利用原核表达系统成功地表达了具有生物学活性的GNLY,为研究其功能、作用机制及临床应用奠定了基础.
作 者：钱b 陈孙孝 周晔 王燕 谷明莉 陈波 陈燕 邓安梅 仲人前 QIAN Cheng CHEN Sun-xiao ZHOU Ye WANG Yan GU Ming-li CHEN Bo CHEN Yan DENG An-mei ZHONG Ren-qian 作者单位：第二军医大学长征医院实验诊断科,全军临床免疫中心,上海,03 刊 名：第二军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 27(8) 分类号：Q786 关键词：颗粒溶素 基因表达 生物学活性篇6：人EPO-Linker-EGFP融合蛋白的设计和生物活性预测
人EPO-Linker-EGFP融合蛋白的设计和生物活性预测
目的探讨hEPO-Linker-EGFP融合蛋白设计的合理性.方法应用Gene Construction Kit2.5,www.expasy.com网站提供的分析方案,分析重组体的开放读框及融合蛋白的柔性,并作了蛋白质二级结构模拟.结果重组体的转录受四环素应答顺式作用元件调控,Linker所在部位柔性高,融合蛋白表达后,二级结构预测Linker不改变蛋白结构,完全符合作者设计hEPO-Linker-EGFP融合蛋白的.初衷.结论重组蛋白设计合理,融合蛋白有很大可能保留了hEPO和EGFP的理化特性,为进一步的实践操作提供了可靠的理论基础.
作 者：戴勇 徐卓佳 李体远 作者单位：暨南大学附属第二医院,广东省深圳市人民医院临床医学研究中心,518020 刊 名：广东医学 ISTIC PKU英文刊名：GUANGDONG MEDICAL JOURNAL 年，卷(期)： 25(11) 分类号： 关键词：促红细胞生长素 绿荧光蛋白 分子结构预测篇7：人血管内皮抑制素在毕赤酵母中的表达纯化及活性测定
人血管内皮抑制素在毕赤酵母中的表达纯化及活性测定
血管内皮抑制素是胶原XⅧC-末端的一个片段,是有效的血管生成抑制因子.克隆了人血管内皮抑制素的基因,并用毕赤酵母进行表达,表达量为50.5 mg/L.发酵液上清经SPSepharose Fast Flow凝胶一步层析,产物纯度达到98%以上,纯化收率达到95%以上.毕赤酵母分泌表达的.人血管内皮抑制素具有免疫活性,能明显抑制鸡胚尿囊膜新生血管的生长,并且能特异性地抑制bFGF刺激的人微血管内皮细胞的迁移,达到抑制效果为50%时所需的蛋白浓度(IC50)为O.4μg/ml.为应用人血管内皮抑制素治疗肿瘤奠定了初步实验基础.
作 者：姚雪静 李壮林 常国栋 原桂勇 于学珍 YAO Xue-jing LI Zhuang-lin CHANG Guo-dong YUAN Gui-yong YU Xue-zhen 作者单位：烟台麦得津生物工程股份有限公司,烟台,264006 刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 26(4) 分类号：Q789 关键词：血管内皮抑制素 血管生成 毕赤酵母 纯化★ 烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达
★ 恶性疟原虫PfRNaseⅡ的克隆表达与降解特性的性状分析论文
★ 生物技术论文
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