人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定（精选8篇）由网友“泪的天使”投稿提供，以下是小编为大家准备的人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定，希望对大家有帮助。
篇1：人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定
人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定
目的 构建人His标记的γ干扰素诱导蛋白10 (interferon-γ-inducible protein 10, IP-10)融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达、纯化,获得有活性的IP-10蛋白,为进一步研究其在炎症过程中的作用机制及寻找新的抗炎途径提供基础.方法 从人肺cDNA文库中PCR扩增无信号肽的`IP-10基因编码序列,构建重组载体pET-14b/IP-10;重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株;经异丙基γ-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导后,用镍离子亲和层析柱纯化融合蛋白,以THP-1细胞进行微室跨膜迁移(transwell)实验鉴定融合蛋白活性.结果 酶切、测序鉴定重组载体pET-14b/IP-10构建正确,并纯化得到高纯度的IP-10融合蛋白.而且该蛋白具有诱导单核细胞THP-1跨膜迁移活性.结论 成功构建了人IP-10融合蛋白表达载体,并纯化得到具有活性的IP-10融合蛋白,为进一步研究IP-10的功能提供了重要的实验材料.
作 者：邵紫韫 彭毅 SHAO Zi-yun PENG Yi 作者单位：邵紫韫,SHAO Zi-yun(广州军区武汉总医院医务部,武汉,430070)彭毅,PENG Yi(广州军区武汉总医院心血管内科)
刊 名：华南国防医学杂志 ISTIC英文刊名：MILITARY MEDICAL JOURNAL OF SOUTH CHINA 年，卷(期)： 22(4) 分类号：Q78 关键词：γ干扰素诱导蛋白10 融合蛋白 细胞迁移篇2：人IP-10启动子的克隆和转录活性的检测
人IP-10启动子的克隆和转录活性的检测
目的克隆干扰素诱导蛋白10(IP-10)5′非编码区(NCR)片段,检测克隆的IP-10启动子驱动的荧光素酶报告基因在LPS激活的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的`转录活性.方法提取人外周血淋巴细胞基因组DNA,以其为模板,利用巢式PCR扩增人IP-10启动子片段,测序正确后克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGL3;将重组质粒pGL3/IP-10P导入HUVEC细胞,检测LPS刺激下荧光素酶活性.结果正确克隆出人IP-10启动子(-2028～-1)片段,成功构建了pGL3/IP-10P报告基因表达载体;证实了LPS可诱导HUVEC细胞中IP-10的高表达.结论成功克隆出人的IP-10启动子片段,并利用荧光素报告基因证实了在HUVEC细胞中LPS可诱导IP-10高转录表达,为深入研究LPS诱导IP-10转录表达的调控机制提供了基础.
作 者：邵紫韫 刘志锋 彭毅 邓鹏 姜勇 作者单位：510515,广州,南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室 刊 名：解放军医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY 年，卷(期)： 31(3) 分类号：Q291 关键词：干扰素诱导蛋白10 脂多糖类 基因,报告篇3：TRAIL蛋白原核表达载体的构建及表达研究
TRAIL蛋白原核表达载体的构建及表达研究
目的 利用蛋白自剪切功能原核表达系统构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胞膜外段融合蛋白表达载体,并进行表达条件优化和初步纯化.方法 设计基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段双链cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的'TRAIL基因与经相同处理的载体pTWIN1相连接,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子.将鉴定(酶切及序列分析)阳性的重组子质粒转入大肠埃希菌ER2566表达菌中, 采用蛋白质SDS-PAGE 电泳方法 分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG) 、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白表达情况.结果 成功获得了包含TRAIL基因胞膜外段的双链cDNA序列,酶切及序列分析证实成功构建了TRAIL胞膜外段蛋白自剪切功能原核表达载体.采用0.3 mmol/L IPTG、15 ℃诱导过夜(14～16 h),目的蛋白获得较高表达量,且大部分为可溶性蛋白.结论 采用大肠埃希氏菌ER2566,TRAIL胞膜外段融合蛋白获得高表达,经简单后续处理即可获得不含任何额外氨基酸的可溶性目的蛋白.
作 者：杨文理 陈守春 陈毅荣 覃扬 YANG Wen-li CHEN Shou-chun CHEN Yi-rong QIN Yang 作者单位：杨文理,覃扬,YANG Wen-li,QIN Yang(四川大学华西基础医学与法医学院,生物化学与分子生物学教研室,成都,610041)陈守春,陈毅荣,CHEN Shou-chun,CHEN Yi-rong(地奥集团新药研究所)
刊 名：四川大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 37(5) 分类号：Q5 关键词：肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 蛋白内含子 原核表达篇4：鸡干扰素-γ的原核表达与生物活性
鸡干扰素-γ的原核表达与生物活性
干扰素(IFN)是多功能细胞因子家族中的`一员,在抗病毒和恶性肿瘤及增强免疫调节能力方面有明显效果,它分为Ⅰ型和Ⅱ型两类,Ⅰ型包括IFN-α和IFN-β等,Ⅱ型又称免疫干扰素IFN-γ,IFN-γ可增强巨噬细胞的吞噬活性及淋巴细胞对靶细胞的特殊细胞毒性[1].
作 者：王黎霞 王彩霞 徐赓 安健 作者单位：王黎霞(北京农学院动物科学技术系,北京,昌平,102206;北京农业职业学院畜牧兽医系,北京,房山,102442)王彩霞,徐赓,安健(北京农学院动物科学技术系,北京,昌平,102206)
刊 名：中国兽医杂志 PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 46(3) 分类号：Q78 关键词：篇5：人载脂蛋白A-Ⅰ的原核表达及二级结构和功能鉴定
人载脂蛋白A-Ⅰ的原核表达及二级结构和功能鉴定
目的`为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ).方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b(+)为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层析对表达蛋白进行纯化.分别使用圆二色分析、浊度澄清试验和胆固醇外流试验对重组apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂质结合动力学及促细胞胆固醇外流能力进行评价.结果获得高表达产量的重组apoA-Ⅰ(12 mg纯化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重组蛋白的α螺旋含量为(54±4)%,脂质结合动力学速率常数k1/2为0.059±0.002 min-1,胆固醇外流百分比为(16.68±1.77)%.结论可获得高产量并具有生物学活性的重组人apoA-Ⅰ;为构建apoA-Ⅰ其他突变体提供模式.
作 者：祝学卫 吴钢 曾武威 薛红 陈保生 ZHU Xue-wei WU Gang ZENG Wu-wei XUE Hong CHEN Bao-sheng 作者单位：中国医学科学院,中国协和医科大学,基础医学研究所,医学分子生物学国家重点实验室,北京,100005 刊 名：基础医学与临床 ISTIC PKU英文刊名：BASIC & CLINICAL MEDICINE 年，卷(期)： 26(4) 分类号：Q816 关键词：人载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达 α螺旋含量 脂质结合 细胞胆固醇外流篇6：hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleukin 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的'hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10.
作 者：王F东 孙自勇 陈俊勇 吴盛 智强 刘建宁 Wang Mindong Sun Ziyong Chen Junyong Wu Sheng Zhi Qiang Liu Jianning 作者单位：王F东,Wang Mindong(南京市公安局刑警支队,江苏,南京,210012)孙自勇,陈俊勇,吴盛,智强,刘建宁,Sun Ziyong,Chen Junyong,Wu Sheng,Zhi Qiang,Liu Jianning(南京大学分子医学研究所,江苏,南京,210093)
刊 名：南京师大学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 29(3) 分类号：Q78 关键词：人白细胞介素-10(hIL-10) 克隆 表达 大肠杆菌 生物学活性 夹心ELISA篇7：健康人APOBEC3G基因的克隆及真核表达载体的构建与鉴定
健康人APOBEC3G基因的克隆及真核表达载体的构建与鉴定
目的 克隆人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide 3G,APOBEC3G)基因cDNA,构建APOBEC3G基因的'真核表达载体,并在体外进行表达和鉴定.方法 采用RT-PER技术从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因,将该基因插入pcDNA3.1真核表达载体,构建pcDNA3.1-A3G真核表达质粒,并利用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-A3G转染HepG2和HL7702细胞,经免疫细胞化学、Western blot等方法检测APOBEC3G真核表达情况.结果 双酶切鉴定和测序结果表明,APOBEC3G真核表达载体构建成功.免疫细胞化学和Western blot结果均显示,转染pcDNA3.1-A3G的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白均高表达,转染空质粒pcDNA3.1和未转染的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白低表达或不表达.结论 成功构建了人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G,为进一步研究APOBEC3G抗HBV作用奠定实验基础.
作 者：甘宜敏 孔凡运 史震 汤仁仙 郑葵阳 作者单位：徐州医学院病原生物学教研室,江苏,徐州,221002 刊 名：徐州医学院学报 ISTIC英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU 年，卷(期)： 30(4) 分类号：Q789 R394.2 关键词：APOBEC3G 克隆 真核表达载体篇8：人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测
人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测
目的:获得大量重组人α防御素(HDα)并检测其活性,为其深入研究提供必要的材料.方法:体外化学合成得到带有羟氨裂解位点编码序列的HDα基因片段,克隆入pBV220-IL-4表达载体构建重组表达载体pBV220-IL-4- HDα.测序正确后将重组质粒转入大肠杆菌DH5α中进行温度诱导表达.经羟氨裂解去除IL-4后,对所得蛋白进行纯化、复性,以SDS-PAGE和生物学活性检测鉴定其特性.结果:经温度诱导后,融合蛋白主要以包涵体的形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的20%;羟氨裂解切除IL-4后,所得目的蛋白的纯度约为99.8%.抑菌活性试验和克隆形成试验显示,所得HDα对细菌生长有明显的`抑制作用.结论:成功地构建了HDα基因的重组表达质粒,获得稳定表达的工程菌,并建立了复性与纯化技术,为进一步对其进行功能研究与应用奠定了基础.
作 者：傅海燕 张剑 路凡 蒲勤 王孝功 卢兹凡 徐俊卿 赵忠良 FU Hai-yan ZHANG Jian LU Fan PU Qin WANG Xiao-gong LU Zi-fan XU Jun-qing ZHAO Zhong-liang 作者单位：傅海燕,张剑,路凡,蒲勤,王孝功,卢兹凡,赵忠良,FU Hai-yan,ZHANG Jian,LU Fan,PU Qin,WANG Xiao-gong,LU Zi-fan,ZHAO Zhong-liang(第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710032)徐俊卿,XU Jun-qing(第四军医大学西京医院放射科,陕西,西安,710032)
刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)：2006 22(2) 分类号：Q786 关键词：人α防御素(HDα) 表达 纯化 生物学活性 检测★ 恶性疟原虫PfRNaseⅡ的克隆表达与降解特性的性状分析论文
★ 烟实夜蛾信息素结合蛋白3 cDNA的克隆、序列分析与原核表达
【人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定（精选8篇）】相关文章：
人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测2023-01-20
高中生物选修一教案2022-12-06
高中生物竞赛大纲2024-01-22
人工合成草鱼生长激素cDNA在大肠杆菌中的表达2022-04-30
生化论文范文2023-04-01
高级生化论文2022-05-08
高中生物20个实验重点知识2022-10-28
高中生物选修一知识点小总结2022-11-14
必修一生物细胞增殖知识点2023-03-24
高三生物复习必背知识点总结梳理2022-06-12