hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定（合集6篇）由网友“有点个性的俗人”投稿提供，以下是小编为大家汇总后的hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定，欢迎参阅，希望可以帮助到有需要的朋友。
篇1：hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定
构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleukin 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的'hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10.
作 者：王F东 孙自勇 陈俊勇 吴盛 智强 刘建宁 Wang Mindong Sun Ziyong Chen Junyong Wu Sheng Zhi Qiang Liu Jianning 作者单位：王F东,Wang Mindong(南京市公安局刑警支队,江苏,南京,210012)孙自勇,陈俊勇,吴盛,智强,刘建宁,Sun Ziyong,Chen Junyong,Wu Sheng,Zhi Qiang,Liu Jianning(南京大学分子医学研究所,江苏,南京,210093)
刊 名：南京师大学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 29(3) 分类号：Q78 关键词：人白细胞介素-10(hIL-10) 克隆 表达 大肠杆菌 生物学活性 夹心ELISA篇2：抗菌抗癌肽CM4N在大肠杆菌中的融合表达与活性鉴定
抗菌抗癌肽CM4N在大肠杆菌中的融合表达与活性鉴定
为探讨内含肽intein在抗菌肽表达与纯化中的应用,采用递归PCR法合成CM4末端添加Asn的'基因CM4N,克隆至E.coli表达载体pTYB11中,构建了与intein的C端融合的表达载体pTYYB11-CM4N.重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,融合蛋白intein-CM4N主要以可溶形式存在于胞内.利用载体中intein中的chitin结合域,将融合蛋白通过chitin亲和层析一步纯化,经DTT诱导intein的自我切割活性,实现CM4N在亲和柱上的切割与分离,透析冻干后得到了纯度95%以上的重组CM4N.活性检测结果显示,重组CM4N具有抗大肠杆菌、沙门氏菌和K562肿瘤细胞的活性.研究认为,内含肽在抗菌肽的基因工程中可能具有重要的应用前景.
作 者：陈玉清 秋雯 焦波 张杰 张双全 CHEN Yu-qing QIU Wen JIAO Bo ZHANG Jie ZHANG Shuang-quan 作者单位：南京师范大学生命科学学院,江苏省分子医学生物技术重点实验室,江苏南京210046 刊 名：药物生物技术 ISTIC英文刊名：PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 15(3) 分类号：Q516 关键词：抗菌肽CM4 原核表达 intein融合 活性篇3：鼠防御素基因Crp4在大肠杆菌中的表达及活性检测
鼠防御素基因Crp4在大肠杆菌中的表达及活性检测
通过基因工程技术,以鼠防御素基因Crp4为研究对象,从鼠回肠末端克隆了鼠防御素Crp4基因的成熟编码序列(约为102 bp),将其与另外2个鼠防御素基因的氨基酸序列进行比对,发现同源性分别高达97.8%和97.1%.将该序列克隆到原核表达载体pET-28a中,构建了重组质粒pET-Crp4,转化DE3感受态并用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE和Wersiernblot结果表明,该基因在pET-28a中成功表达.体外抑菌试验证实,重组Crp4蛋白对金黄色葡萄球菌、李斯特菌、大肠杆菌等具有一定的.抑菌活性.
作 者：陈宝玉 宋德光 宋斯伟 查云峰 邓旭明 曾凡勤 作者单位：陈宝玉,宋德光,宋斯伟,邓旭明,曾凡勤(吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062)查云峰(广东省动物防疫监督总所,广州,510230)
刊 名：吉林农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF JILIN AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 28(5) 分类号：Q786 S852.61 关键词：防御素 Crp4 大肠杆菌 原核表达 生物学活性篇4：基因重组BDNF蛋白在大肠杆菌中的表达纯化与功能鉴定
基因重组BDNF蛋白在大肠杆菌中的表达纯化与功能鉴定
目的 构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,以获取高产量、低成本、高纯度且具有生物学活性的BDNF蛋白.方法 以人的全长BDNFcDNA为模板,用PCR方法扩增成熟区BDNF的cDNA,应用基因重组技术将人BDNF cDNA克隆到质粒pET-30a(+)中,进行限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS,经IPTG诱导表达后,用Ni-NTA亲和层析纯化获取蛋白,用SDS-PAGE和western blot方法鉴另,噻唑蓝(MTT)法检测重组蛋白对PC12细胞增殖的.影响. 结果 扩增出的人BDNF cDNA片段克隆进了原核表达载体,经酶切和核酸测序鉴定,得到了正确的重组质粒pET-BDNF,并在大肠杆菌中获得了表达.纯化后的蛋白经考马氏亮蓝染色呈单一条带;用抗BDNF的抗体进行western blot分析证明目的蛋白获得了表达.基因重组BDNF蛋白能够促进PC12细胞增殖.结论 本研究成功构建了表达基因重组人BDNF的原核表达载体,基因重组人BDNF蛋白在大肠杆菌中获得了表达和纯化,所获得的基因重组蛋白具有较好的生物学活性.
作 者：马蕾蕾 苏丹 季爱民 MA Lei-lei SU Dan JI Ai-min 作者单位：510282,广州,南方医科大学珠江医院新药研发中心 刊 名：中华神经医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE 年，卷(期)：2006 5(11) 分类号：Q5 关键词：脑源性神经营养因子 大肠杆菌 蛋白表达 蛋白纯化 生物学活性篇5：截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定
截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定
为构建HCV截短型ns5b△21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体.运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5b△21基因;克隆入原核表达载体pRSETA.将重组表达质粒pRSETA-ns5b△21转化B121大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的.NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5b△21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清.说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体.
作 者：田江红 徐志凯 雷迎峰 尹文 陈任安 汪桦 吕欣 杨敬 孙梦宁 姚敏 作者单位：第四军医大学基础部微生物学教研室,西安,710032 刊 名：科学技术与工程 ISTIC英文刊名：SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING 年，卷(期)： 10(4) 分类号：Q343.17 关键词：HCV NS5B RNA聚合酶 大肠杆菌 蛋白表达篇6：重组人骨形态发生蛋白2在CHO细胞中的表达、鉴定及活性分析
重组人骨形态发生蛋白2在CHO细胞中的表达、鉴定及活性分析
构建真核表达载体pCDNA3.1(+)-hBMP-2,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有700μg/mL G418的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-2的表达量.收集的rhBMP-2蛋白进行Western blot检测,还原蛋白样品电泳产生一条大小约为18kD的特异性条带,非还原蛋白样品电泳产生一条大小约为30kD的'特异性条带,提示表达的rhBMP-2是经过糖基化修饰的,且以同源二聚体形式分泌表达.单细胞分离培养得到14株rCHO(hBMP-2)单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-2表达水平,最高可达7.83μg/24h/106cells.活性分析结果表明,表达的rhBMP-2具有很强的生物学活性.
作 者：张道永 杨爽 吕树军 闫继东 朱天慧 ZHANG Dao-Yong YANG Shuang L(U) Shu-Jun YAN Ji-Dong ZHU Tian-Hui 作者单位：张道永,杨爽,吕树军,闫继东,ZHANG Dao-Yong,YANG Shuang,L(U) Shu-Jun,YAN Ji-Dong(南开大学医学院分子遗传学实验室,天津,300071)朱天慧,ZHU Tian-Hui(南开大学医学院分子遗传学实验室,天津,300071;南开大学生物活性材料教育部重点实验室,天津,300071)
刊 名：生物工程学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 22(6) 分类号：Q786 关键词：人骨形态发生蛋白2 CHO 共转染 C2C12 碱性磷酸酶★ 基因工程论文
★ 微生物实验总结
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