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篇1：Ad-vcam-1-gfP重组腺病毒转染人脐血源基质细胞的实验研究
Ad-vcam-1-gfP重组腺病毒转染人脐血源基质细胞的实验研究
本研究探讨血管细胞黏附分子(vcam-1)修饰的人脐血源基质细胞(human umbilical cord blood derived strom cells,CBDSC)在造血调控中的作用.采用DNA重组技术,将目的基因vcam-1克隆至含有报告基因gfp的`穿梭质粒;在BJ5183细胞中与pAdeasy-1质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体转染人脐血源基质细胞并进行鉴定.结果表明:vcam-1基因与pAdTrack-CMV载体成功连接,经Not Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切后电泳可见2个大小约为9kb和2 kb左右条带,经PCR法扩增后电泳可见1个600 bp左右条带,证明pAdTrack-CMV-vcam-1重组质粒构建成功.pAdTrack-CMV-vcam-1质粒与pAdeasy-1质粒同源重组后,产物经PAC Ⅰ酶切后电泳可观察到2个大小约为31 kb、4 kb左右条带,与预期结果相符.腺病毒载体转染人脐血源基质细胞后免疫化学、RT-PCR、荧光显微镜等方法均检测到目的基因vcam-1的表达.结论:构建ad-vcam-1-gfp重组腺病毒载体可成功转染人脐血源基质细胞并使其vcam-1表达增高.
作 者：张曦 司英健 陈幸华 刘耀 高力 高蕾 彭贤贵 王庆余 ZHANG Xi SI Ying-Jian CHEN Xing-Hua LIU Yao GAO Li GAO Lei PENG Xian-Gui WANG Qing-Yu 作者单位：第三军医大学新桥医院血液科,重庆,400037 刊 名：中国实验血液学杂志 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY 年，卷(期)： 16(3) 分类号：Q78 Q754 关键词：vcam-1 CBDSC GFP 重组腺病毒载体篇2：腺病毒介导EGFP基因转染神经干细胞的实验研究
腺病毒介导EGFP基因转染神经干细胞的实验研究
目的 探讨腺病毒(adenovirus)介导的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在神经干细胞(NSCs)的'表达规律及转染对神经干细胞增殖、分化的影响.方法 用不同感染复数的携带EGFP基因的腺病毒(Ad/EGFP)转染NSCs,在荧光倒置相差显微镜下观察EGFP的表达情况,同时用台盼蓝染色、细胞球计数、免疫细胞化学方法分别检测对照组和转染组细胞的活力、增殖、分化情况.结果 Ad/EGFP转染16 h后NSCs发出绿色荧光,在第7天左右荧光强度达高峰并可持续稳定表达20天左右,Nestin表达阳性.在分化后细胞的胞体与突起均可见绿色荧光,部分细胞β-Ⅲ tubulin、GFAP表达阳性.同时观察到对照组和转染组的NSCs在第7天、14天、21天时细胞活力、增殖、分化情况均无统计学差异(P＞0.05).结论 Ad/EGFP可以高效转染新生大鼠海马NSCs,且不影响NSCs的存活、生长和分化.EGFP基因是神经干细胞的理想的报告基因.
作 者：欧阳长杰 赵玉 徐铁军 OUYANG Chang-jie ZHAO Yu XU Tie-jun 作者单位：徐州医学院解剖与神经生物学教研室,江苏,徐州,221002 刊 名：徐州医学院学报 ISTIC英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU 年，卷(期)： 27(7) 分类号：Q786 关键词：神经干细胞 腺病毒 增强型绿色荧光蛋白 转染 基因表达篇3：重组腺病毒Ad-Rb94基因联合放疗对人肝癌细胞生长的抑制作用
重组腺病毒Ad-Rb94基因联合放疗对人肝癌细胞生长的抑制作用
目的 探讨重组腺病毒Ad-Rb94基因联合放射治疗对人肝癌细胞的联合抑瘤作用.方法 将重组腺病毒Ad-Rb94基因导入人肝癌细胞株HepG2,观察联合放射治疗对细胞生长、细胞周期及凋亡的`影响.结果 Ad-Rb94基因组、放疗组和Ad-Rb94基因联合放疗组HepG2细胞的生长均受到抑制,尤其在转染后96h细胞存活数量最低,与Ad-lacZ组和空白对照组比较差异均有显著性(P<0.05).联合治疗组HepG2细胞生长最为缓慢, Rb94基因转染后96h Ad-Rb94联合放疗组的抑制作用均明显高于Ad-Rb94组和放疗组(P0.05).Ad-Rb94组、放疗组及Ad-Rb94联合放疗组HepG2停留在G2/M期的细胞增加,G0/G1期和S期细胞数量减少,凋亡细胞数量增加,其中以联合治疗组G2/M期细胞和凋亡细胞所占比例最高.结论 Ad-Rb94基因联合放疗具有协同作用,有效地抑制肝癌细胞的生长.
作 者：张耀文 王芹 李进 穆传杰 曹永珍 荣庆林 作者单位：张耀文,曹永珍,荣庆林(天津医科大学总医院放疗科,天津,300052)王芹,李进,穆传杰(中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所分子核医学重点实验室,天津,300192)
刊 名：中国辐射卫生 PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF RADIOLOGICAL HEALTH 年，卷(期)： 17(2) 分类号：Q784 R815 关键词：Rb94基因 放射治疗 肝癌篇4：腺病毒介导的骨形态发生蛋白-2基因转染脂肪间充质干细胞的实验研究
腺病毒介导的骨形态发生蛋白-2基因转染脂肪间充质干细胞的实验研究
目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(Ad-hBMP-2)基因转染大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)的可行性及其成骨特性.方法取4周龄SD大鼠腹股沟的脂肪组织,经体外分离培养的方法获得ADSCs,分别转染以腺病毒为载体的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)基因和Ad-hBMP-2基因.用荧光显微镜每隔12 h观察转染Ad-GFP的细胞,并确定转染率,观察其形态变化,绘制生长曲线;利用免疫细胞化学法对转染Ad-hBMP-2的细胞作碱性磷酸酶(ALP)染色,用免疫细胞化学法作骨钙素(OC)检测确定成骨活性,Western blot法检测hBMP-2的表达.结果12 h后荧光显微镜观察转染Ad-GFP的`细胞,有52%的阳性表达细胞,48 h后转染率达95%;转染Ad-hBMP-2后倍增时间延长,ALP、OC检测为阳性表达,hBMP-2蛋白转染后48 h为阳性表达,并持续至第5代.结论ADSCs可以作为腺病毒转染的载体,转染Ad-hBMP-2基因后有明显的成骨作用,可以作为骨组织工程的种子细胞.
作 者：郑培惠 魏奉才 晋国营 单秀丽 孙树阳 ZHENG Pei-hui WEI Feng-cai JIN Guo-ying SHAN Xiu-li SUN Shu-yang 作者单位：郑培惠,ZHENG Pei-hui(山东大学山东省立医院,口腔颌面外科,山东,济南,250021)魏奉才,晋国营,WEI Feng-cai,JIN Guo-ying(山东大学齐鲁医院,口腔颌面外科)
单秀丽,孙树阳,SHAN Xiu-li,SUN Shu-yang(山东大学口腔医院,中心实验室,山东,济南,250012)
刊 名：华西口腔医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY 年，卷(期)： 24(3) 分类号：Q254 关键词：脂肪间充质干细胞 骨形态发生蛋白-2 腺病毒 基因转染篇5：脐血CD34+细胞向内皮细胞定向诱导分化的实验研究
脐血CD34+细胞向内皮细胞定向诱导分化的实验研究
目的探讨人脐血CD34+细胞体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的`可行性,并检测其表型.方法采集新鲜脐血经抗凝处理及无菌包装,Ficoll密度梯度离心法得单个核细胞,磁珠分选方法(MACS)分离出CD34+单个核细胞,M-199培养基中诱导分化,细胞形态学观察CD34+和CD34-细胞生长情况,流式细胞仪检测内皮细胞CD31表型,免疫组化验证蛋白水平表达.结果细胞形态学观察发现,刚分离的CD34+ 和CD34-单个核细胞呈圆形,形态小.CD34+细胞培养3 d后有明显集落形成,7 d后呈梭行细胞,出现典型线样排列结构.经诱导培养后,内皮细胞表型CD31阳性率为(70.03±10.27)%.免疫组化染色证实了内皮特异性成分ecNOS和flk-1/KDR蛋白水平的表达.而CD34-细胞单独培养,少部分细胞贴壁,呈现出不规则形态.结论 MACS法分离脐血CD34+细胞,体外诱导扩增和分化后贴壁细胞具有内皮细胞形态,通过流式细胞仪和免疫组化验证了贴壁细胞中大部分细胞具有内皮系标志物表达.
作 者：邵琴 王长谦 范华骅 何奔 刘 聂晓绚 姜萌 高跞 SHAO Qin WANG Chang-qian FAN Hua-hua HE Ben LIU Yan NIE Xiao-xuan JIANG Meng GAO Li 作者单位：邵琴,王长谦,何奔,姜萌,SHAO Qin,WANG Chang-qian,HE Ben,JIANG Meng(上海交通大学医学院仁济医院心内科,上海,01)范华骅,刘,聂晓绚,高跞,FAN Hua-hua,LIU Yan,NIE Xiao-xuan,GAO Li(上海血液中心血液工程研究室)
刊 名：上海交通大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE) 年，卷(期)：2006 26(3) 分类号：Q813.11 关键词：脐血 CD34+单个核细胞 诱导分化 内皮细胞篇6：恒河猴骨髓基质细胞向成熟神经细胞分化的实验研究
恒河猴骨髓基质细胞向成熟神经细胞分化的实验研究
目的.研究恒河猴骨髓基质细胞(BMSCs)在体外向神经细胞诱导分化过程中神经递质分泌和神经细胞抗原表型表达情况.方法无菌条件下密度梯度法分离猴BMSCs,在体外应用神经干细胞培养液进行体外培养和诱导分化,分阶段用高效液相色谱法检测培养基中单胺类生物活性物质的含量,免疫细胞化学方法检测神经细胞抗原表型.结果高效液相检测神经干细胞培养基未测到单胺类生物活性物质,而经体外培养增殖10 d、14 d、30 d的细胞培养基可检测到去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA).Asp方差分析显示:随着BMSCs培养天数的增加,培养基中所含的NE和DA无显著性差异(P＞0.05).同期细胞免疫组化检测出酪氨酸羟化酶(TH)、巢蛋白抗体(nestin)、β-微管蛋白(β-tublin)、胶质原性纤维酸性蛋白抗体(GFAP)和神经元特异烯醇化酶(NSE)抗原表达.结论恒河猴BMSCs能在体外增殖,在适宜条件下能分化成神经元样细胞,并合成、分泌NE和DA;部分细胞表达神经干细胞、成熟神经元、胶质细胞和DA能神经元的抗原表型,提示在一定条件下,诱导分化的BMSCs经过神经干细胞阶段可向成熟神经组织细胞分化.
作 者：徐强 徐如祥 姜晓丹 潘力 陈剑荣 蔡颖谦 张世忠 XU Qiang XU Ru-xiang JIANG Xiao-dan PAN Li CHEN Jian-rong CAI Ying-qian ZHANG Shi-zhong 作者单位：徐强,潘力,XU Qiang,PAN Li(200040,上海,复旦大学华山医院神经外科)徐如祥,姜晓丹,陈剑荣,蔡颖谦,张世忠,XU Ru-xiang,JIANG Xiao-dan,CHEN Jian-rong,CAI Ying-qian,ZHANG Shi-zhong(510282,广州,南方医科大学珠江医院神经外科)
刊 名：中华神经医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE 年，卷(期)： 5(5) 分类号：Q254 关键词：骨髓基质细胞 神经干细胞 高效液相色谱法 去甲肾上腺素 多巴胺 恒河猴篇7：TGF-β1基因转染大鼠脂肪干细胞向软骨细胞分化的实验研究
TGF-β1基因转染大鼠脂肪干细胞向软骨细胞分化的实验研究
目的 TGF-β1基因转染大鼠的ADSCs(adipose stromal cells,ADSCs),诱导其向软骨细胞分化,为软骨组织工程学种子细胞提供新方法 .方法 分离、培养大鼠的ADSCs,免疫荧光法进行鉴定;TGF-β1基因转染ADSCs,对转染后细胞进行筛选;MTT法测定筛选后细胞的增殖活性;RT-PCR、Western blot对筛选后细胞的表达进行检测.结果 成功分离、培养大鼠的ADSCs;细胞表面标志物CD29和CD44表达阳性,CD106和CD34表达阴性;基因转染后细胞的增殖力变强;转染TGF-β1的.ADSCs在目的基因TGF-β1、SOX9、Aggrecan、Collagen II Mrna的表达和软骨特异性基质-Collagen II的分泌增强,明显高于对照组和转染空载体组;结果 TGF-β1基因转染后ADSCs具有了软骨细胞的表型特征,可以用作软骨组织工程的种子细胞.
作 者：付勤 于冬冬 王勇 宫树一 Fu Qin Yu Dongdong Wang Yong Gong Shuyi 作者单位：中国医科大学附属二院脊柱外科,沈阳,110004 刊 名：中国组织化学与细胞化学杂志 ISTIC英文刊名：CHINESE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY 年，卷(期)： 16(6) 分类号：Q813 关键词：脂肪干细胞 基因转染 转化生长因子β1 分化 大鼠篇8：CXCR4基因转染的猪BMSCs体外诱导分化为心肌样细胞的实验研究
CXCR4基因转染的猪BMSCs体外诱导分化为心肌样细胞的实验研究
目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)受体CXCR4基因转染的`猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外诱导分化为心肌样细胞的可行性.方法:按照Nance方法培养BMSCs,转染带荧光的CXCR4基因,流式细胞仪检测转染后BMSCs的细胞周期,用5-氮胞苷(5-aza)诱导,并行结蛋白、肌球蛋白重链、心肌特异性肌钙蛋白I免疫组化鉴定.对照组为未转染CXCR4基因的BMSCs.结果:体外培养的原代BMSCs 10～14d达到融合,CXCR4基因转染后的BMSCs能成功表达CXCR4,转染前后细胞周期无明显改变.与对照组相同,经5-aza刺激后,部分BMSCs成梭形,结蛋白、肌球蛋白重链、心肌特异性肌钙蛋白I免疫组化染色均为阳性.结论:CXCR4基因转染的猪BMSCs在体外条件下生长稳定,传代后仍保持未分化状态,有分化成心肌样细胞的潜能.
作 者：陈中璞 李拥军 姚玉宇 蒋益波 钱琪 潘啸东 CHEN Zhong-pu LI Yong-jun YAO Yu-yu JIANG Yi-bo QIAN Qi PAN Xiao-dong 作者单位：陈中璞,蒋益波,钱琪,潘啸东,CHEN Zhong-pu,JIANG Yi-bo,QIAN Qi,PAN Xiao-dong(东南大学医学院,江苏,南京,210009)李拥军,姚玉宇,LI Yong-jun,YAO Yu-yu(东南大学附属中大医院,心内科,江苏,南京,210009)
刊 名：东南大学学报（医学版） ISTIC英文刊名：JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2010 29(2) 分类号：Q813 关键词：基质细胞衍生因子-1 CXCR4基因 骨髓间充质干细胞 体外诱导 心肌样细胞★ 微生物学试题
★ P21对DNA聚合酶δ表达的抑制及其对MCF7细胞增殖和恶性表型的影响
★ 动物细胞培养
★ 食品生物技术简历
★ 高考生物必背知识
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