当前位置：首页 > 实用文档 > 其他范文> 不同类型血清对大鼠脂肪干细胞分离培养的影响

不同类型血清对大鼠脂肪干细胞分离培养的影响

时间：2023-01-12 07:40:30 其他范文收藏本文下载本文

不同类型血清对大鼠脂肪干细胞分离培养的影响（精选10篇）由网友“半亩慢”投稿提供，以下是小编为大家整理后的不同类型血清对大鼠脂肪干细胞分离培养的影响，欢迎阅读与收藏。

篇1：不同类型血清对大鼠脂肪干细胞分离培养的影响

不同类型血清对大鼠脂肪干细胞分离培养的影响

目的研究不同血清培养基对脂肪干细胞分离培养的影响.方法用4种不同类型的`血清培养基分离培养大鼠脂肪干细胞,免疫荧光法检测培养细胞CD34、CD90、CD133、Flk-1表面标志;成骨诱导液诱导分化,于14 d进行碱性磷酸酶和钙染色检验各细胞成骨分化特性.结果 (1)新生牛血清组可见贴壁单个核细胞形态单一,呈梭形生长,无重叠现象;胎牛血清组均可见大量多角细胞呈巢状生长,形成铺路石样形态,间或有梭形细胞存在; (2)新生牛血清组梭形贴壁细胞免疫荧光检测可见CD90为阳性,CD34、CD133、Flk-1染色均为阴性;胎牛血清组多角形细胞CD34、Flk-1均为阳性,CD133组部分为阳性,CD90为阴性; (3)新生牛血清组贴壁细胞多数呈碱性磷酸酶阳性;胎牛血清组细胞多角状细胞死亡,形成空白区,梭形细胞呈碱性磷酸酶阳性; (4)新生牛血清组均可见大量红色钙结节影;胎牛血清组细胞多角状细胞死亡,形成空白区,梭形细胞红色钙结节影.结论 (1)新生牛血清培养脂肪干细胞可以得到较纯的细胞; (2)胎牛血清组培养含有大量的血管内皮细胞.

作者：王福科赵德萍代晓明李逸松何晓光刘流作者单位：王福科,代晓明,李逸松,何晓光,刘流(昆明医学院第一附属医院头颈外科,云南昆明,650031)

赵德萍(昆明医学院第一附属医院实验中心,云南昆明,650031)

刊名：昆明医学院学报 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF KUNMING MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 31(3) 分类号：Q813.1 关键词：脂肪干细胞免疫荧光血清血管内皮细胞

篇2：氟化钠对大鼠血清微量元素的影响

氟化钠对大鼠血清微量元素的影响

为探讨氟化钠(NaF)对大鼠血清四种微量元素含量的影响,将 80只2月龄SPF级SD大鼠,雌雄各半,随机分成8组:对照组[幼年(CS)、成年(AS)]和用药组[幼年高氟(CHS)、成年高氟(AHS)和幼年低氟(CLS)、成年低氟(ALS)组,长期高氟(HS)和低氟(LS)组];对照组灌胃生理盐水,用药组分别按相应时间给予不同剂量的NaF灌胃.结果表明,与CS组相比,CHS组和CLS组的.P分别增加100%(P＜0.05)和193.8%(P＜0.05);与AS组相比,HS组的Ca、Zn分别下降了20.5%(P＜0.05)和40%(P＜0.05),而P则增加了74% (P＜0.05),LS组的Zn也下降了33.3%(P＜0.05).提示:长期使用氟化钠可导致幼年大鼠血中化学元素代谢紊乱.

作者：刘珊吴天秀廖进民黄连芳陈艳陈文双 LIU Shan WU Tianxiu LIAO Jinmin HUANG Lianfang CHEN Yan CHEN Wenshuang 作者单位：广东医学院广东省天然药物研究与开发重点实验室,广东,湛江,524023 刊名：广东微量元素科学英文刊名：GUANGDONG TRACE ELEMENTS SCIENCE 年，卷(期)： 16(3) 分类号：Q581 关键词：氟化钠微量元素大鼠

篇3：慢性应激不同方式对大鼠血清皮质酮的影响

慢性应激不同方式对大鼠血清皮质酮的影响

目的:比较慢性应激不同方式对生理状态大鼠血清皮质酮水平的影响,研究机体慢性应激反应的.整体性适应特征.方法:采用连续4周的适宜游泳、束缚和二者复合的三种应激方式后,测定大鼠血清皮质酮基础含量,分析不同慢性应激方式对皮质酮水平的影响.结果:血清皮质酮水平与对照组比较,复合组无显著性差异;游泳组虽升高但无显著性;束缚组升高有显著性意义.结论:束缚可致大鼠血清皮质酮水平增高;初步认定游泳与束缚复合慢性应激方式可能对机体的整体适应性能具有积极意义.

作者：王学瑞王毓洪刘奔苏桂新秦毅高原郑伦范金爽作者单位：天津医科大学,天津,300070 刊名：中国应用生理学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF APPLIED PHYSIOLOGY 年，卷(期)： 22(4) 分类号：Q142.9 R363.2 关键词：皮质酮慢性束缚应激适宜游泳

篇4：大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养

大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养

为了确定大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离和培养的方法,建立了稳定的MSCs体外培养扩增体系,通过密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养大鼠MSCs,观察了细胞的形态,研究了其增殖及生长特征,并应用流式细胞术测定了细胞周期及CD29,CD44,CD45和HLA-DR的.表达.结果表明,在体外培养条件下大鼠MSCs贴壁生长,为成纤维细胞样;CD45和HLA-DR的表达呈阴性,CD29和CD44的表达呈阳性;细胞周期的G0/G1期约占95%,具有原始细胞的特征.说明建立的体外培养扩增体系可获得形态单一、生长稳定、增殖性较强、较均一的大鼠MSCs.

作者：李延清刘霞 LI Yan-qing LIU Xia 作者单位：李延清,LI Yan-qing(延安大学,生命科学学院,陕西,延安,716000)

刘霞,LIU Xia(延安大学,生命科学学院,陕西,延安,716000;西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100)

刊名：西北农林科技大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 34(5) 分类号：Q813.1+1 关键词：大鼠骨髓间充质干细胞细胞形态细胞周期密度梯度离心流式细胞术

篇5：过量碘对大鼠血清TC和TG水平的影响

过量碘对大鼠血清TC和TG水平的影响

目的观察长期过量碘摄入对大鼠血清TC和TG水平的影响,并对其在评价过量碘危害中的意义进行探讨.方法将60只Wistar大鼠按体重随机分为6组:A组正常对照组,给予去离子水;B～F组为过量碘组,碘剂量分别为1800、3600、7200、14000和28000μg/L,喂饲以KIO3配制成不同浓度的高碘水.3个月后,观察甲状腺病理变化,测定尿碘水平、血清甲状腺激素水平和血脂水平.结果各过量碘组大鼠甲状腺未出现明显病理组织学改变.各过量碘组大鼠的尿碘水平随着碘剂量的升高显著升高.TT4水平呈剂量依赖性的'降低,在7200μg/L组开始与对照组相比有显著性差异.TT3水平各组间无显著性差异.血清TC水平与碘剂量呈显著正相关,在3600μg/L组就显著高于正常对照组.TG水平虽有升高,但各组间无显著性差异.血脂与甲状腺激素和尿碘水平的相关性分析表明,血清TC水平与尿碘水平呈显著正相关,与TT4水平呈显著负相关.结论长期过量碘摄入会升高大鼠血脂水平,血脂可以与尿碘、血甲状腺激素一起作为监测过量碘摄入的生物标志物.

作者：杨雪锋庞红徐健郭怀兰侯晓晖陈骁熠孙秀发作者单位：华中科技大学同济医学院公共卫生学院营养与食品卫生学系,武汉,430030 刊名：卫生研究 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF HYGIENE RESEARCH 年，卷(期)： 35(1) 分类号：Q573 R581.1 关键词：过量碘血脂甲状腺激素尿碘生物标志物

篇6：猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化

猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化

脂肪间充质干细胞(Adipose mesenchymal stem cell,AMSCs)是一类来源于脂肪组织并具有多向分化潜能的干细胞.近年来的研究证明,脂肪组织具有取材方便和干细胞含量高的.优势,有望在研究与应用领域成为骨髓干细胞的替代物.猪是一种比啮齿类更接近人类的模式动物,具有较强的脂肪沉积能力.本研究探讨了猪脂肪间充质干细胞的体外分离纯化、培养扩增和向脂肪细胞诱导分化的条件.采用Ⅰ型胶原酶消化分离脂肪微管基质成分,传代培养扩增,流式细胞仪检测细胞表面标记.取第3-7代AMSCs,采用不同方法诱导AMSCs向脂肪细胞分化,光学显微镜下可观察到诱导后的细胞内有高折光性的小脂滴出现,油红O染色成阳性,不同诱导方法诱导率不同.被诱导细胞用RT-PCR可检测到脂肪细胞分化标志基因LPL和PPARγ的表达.结果表明可以从脂肪组织中分离培养出AMSCs,经传代后可提高其纯度.CD44、CD105表达呈阳性,CD14、CD34、S-100、HLA-DR呈阴性,在合适的诱导条件下,可向脂肪细胞分化.

作者：张国华屈长青杨公社 ZHANG Guo-Hua QU Chang-Qing YANG Gong-She 作者单位：张国华,杨公社,ZHANG Guo-Hua,YANG Gong-She(西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100)

屈长青,QU Chang-Qing(西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100;阜阳师范学院生物系,安徽阜阳,236032)

刊名：动物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ZOOLOGICA SINICA 年，卷(期)：2006 52(5) 分类号：Q95 关键词：猪脂肪间充质干细胞脂肪细胞分化

篇7：大鼠骨髓间充质干细胞分离与培养条件的优化研究

大鼠骨髓间充质干细胞分离与培养条件的优化研究

目的:建立和优化大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的.分离培养条件,以获得群体均一、未分化状态保持良好的MSCs.方法:收集不同周龄大鼠骨髓细胞;以不同浓度Percoll密度梯度离心分离骨髓单个核细胞;以60%低糖DMEM40%MCDB201为基础培养基,培养24h去悬浮细胞;以不同接种密度传代培养;碱性磷酸酶染色和油红O染色考察MSCs向骨和脂肪组织分化的潜能.结果:采用57%Percoll液的分离效果优于70%Percoll液.6周龄(体重约180g)大鼠能在细胞分离的质和量上达到最佳效果.24h进行悬浮细胞去除、5×103/cm2接种密度传代培养,光镜和电镜显示MSCs增殖能力强,功能状态活跃,成脂成骨实验显示多向分化潜能保持良好.结论:优化大鼠周龄、分离液的密度、细胞培养条件及改进培养方法有助于获得多向分化潜能保持良好的均一的MSCs.

作者：晏丹舒赛男 YAN Dan SHU Sai-nan 作者单位：晏丹,YAN Dan(武汉科技大学医学院病理教研室,湖北,武汉,430065)

舒赛男,SHU Sai-nan(华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科,湖北,武汉,430030)

刊名：现代生物医学进展 ISTIC英文刊名：PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE 年，卷(期)： 8(1) 分类号：Q813.1 关键词：间充质干细胞分离培养优化

篇8：大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养表型鉴定与标记

大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养表型鉴定与标记

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离培养、表型鉴定和标记的方法,为临床进行细胞移植治疗心、肝、脑等器官急性衰竭提供种子细胞.方法无菌条件下取大鼠股骨、胫骨和腓骨,用冲洗法冲出骨髓,用直接贴壁法分离纯化MSCs,体外扩增,用免疫细胞化学法及流式细胞仪分别对培养的MSCs进行鉴定,并检测第3代MSCs的.细胞周期.结果体外培养的原代MSCs 72 h内可见有少量贴壁细胞,7 d左右达到汇合.免疫细胞化学示,MSCs CD29、CD44、CD73、CD105、CD166表达阳性,而CD14、CD34、CD45表达阴性.流式细胞仪示,CD14阳性率为0.19%、CD29为64.36%、CD34为0.17%、CD44为86.73%、CD45为0.18%、CD73为90.21%、CD105为74.25%、CD166为54.60%.细胞周期显示,第3代MSCs约有90%的细胞处于G0/G1期.结论MSCs在体外很容易分离培养和扩增,DAPI标记MSCs敏感性好,标记效率高,可作为标记细胞的一种有效手段,MSCs体外培养成功为细胞移植治疗急危重症器官衰竭提供新的治疗途径.

作者：何忠杰马俊勋方驰华杨丽萍作者单位：何忠杰,马俊勋(南方医科大学附属珠江医院普通外科,广东,广州,510280)

方驰华(中国人民解放军总医院304急救部,北京,100037)

杨丽萍(中国人民解放军总医院304烧伤研究所,北京,100037)

刊名：中国急救医学 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CRITICAL CARE MEDICINE 年，卷(期)： 25(12) 分类号：Q503 Q813.1+1 关键词：骨髓间充质干细胞分离培养表型细胞周期大鼠流式细胞仪

篇9：鸡蛋白提取液对体外培养干细胞蛋白的影响论文

鸡蛋白提取液对体外培养干细胞蛋白的影响论文

发现一种提取液能促进体细胞向干细胞转变将在再生医学研究中有重要的意义。有文献报道动物的卵细胞提取液能重新编程体细胞，包括猪的卵细胞[1]和非洲爪蟾的卵细胞[2,3]提取液都能使体细胞核重编程。在这个研究中，我们用鸡蛋白提取液作用于不同细胞，共培养 3 d 后，收集细胞，送公司做干细胞蛋白芯片检测，现将研究报道如下。

1 材料与方法

1. 1 细胞来源 4 种细胞为我们实验室经常培养的细胞，C57 小鼠的骨髓间充质干细胞（ C57-BMSC）（自己制备） ,树鼩的脐带间充质干细胞（ TS-UC-MSC）（自己制备） ,293T 细胞（购自中国科学院昆明细胞库）和 GFP 慢病毒转染成功的 293T 细胞（ 293T-GFP）（自己转染成功） .

1. 2 鸡卵清提取液的制备取几个鸡卵，无菌分离卵清和卵黄，卵清按 1∶ 1 加裂解液，充分搅匀，存放于 -20℃。冻融 3 次后，离心，取上清，4℃保存。裂解液配方： 50 mmol/L NaCl,5 mmol/L MgCl2,100mmol / L HEPES,pH8. 2,1 mmol / L 二硫苏糖醇（ DTT） ,0. 1 mmol/L 苯甲基磺酰氟（ PMSF）和蛋白酶抑制剂。由此得到的提取液为鸡卵清提取液。获得的提取液用 50% 的终浓度与 293T 细胞共培养 3d,然后用定量 PCR 的方法检测细胞多能基因 OCT4和 NANOG 与对照（培养基培养）相比明显升高，即为质控指标合格，可用于下面的实验。

1. 3 干细胞蛋白芯片检测步骤每个芯片孔中加入 100 μl 的 1 × 封闭液，室温摇床上孵育 30 min,避免产生气泡；抽去封闭液，每个孔中添加 100 μl 样品，一个阵列一个样品； 4 ℃ 振荡过夜孵育。使用Thermo Scientific Wellwash Versa 芯片洗板机清洗玻片，每孔加入 70 μl 生物素标记抗体；室温震荡孵育1 ~ 2 h,清洗，每孔加入 70 μl 的 1 500 倍稀释的荧光剂-链霉亲和素，用密封条贴住玻片，然后用铝箔纸包住玻片避光室温震荡孵育 1 ~2 h.清洗，采用激光扫描仪例如 Axon GenePix 扫描信号。采用芯片分析软件提取数据，对于 Fold change,选取大于1. 5 为有统计学意义。

1. 4 Western blot 检测多能标志蛋白 OCT4 和NANOG 兔抗人 OCT4 多克隆抗体购自 Immunoa-way 公司，鼠抗人 NANOG 单克隆抗体购自 Millipore公司，二抗均购自碧云天生物技术有限公司。293T细胞在 6 孔板中，一孔加培养基，一孔加 50% 终浓度的鸡蛋白提取液，共培养 3 d 后，用碧云天的 IP细胞裂解液提细胞蛋白，取 50 μl 细胞蛋白液加 10μl 6 × 的上样缓冲液，100℃ 水浴 5 min,上样 20 μl,进行 SDS-PAGE 电泳，电泳结束后，100 v 电压转膜1 h,膜用 5% 脱脂奶粉的 TBS 封闭 37℃ 1 h,将一抗1∶ 250 稀释于 2% 脱脂奶粉的 TBS 中，37℃ 振摇 1 h,TTBS 洗 3 次，每次 5 min,二抗 1∶ 200 稀释于 2% 脱脂奶粉的 TBS 中，37℃振摇 1 h,TTBS 洗 3 次，每次5 min,ECL 显色，用 Tanon 的化学发光成像仪检测发光条带。

2 结果

2. 1 C57-BMSC 有 3 个蛋白发生了统计学意义的'改变 SOX17、BMPR-1A 和 NANOG 是干细胞中表达的蛋白，当体细胞向干细胞转变后细胞中这几个蛋白的表达升高，我们用 50% 终浓度的鸡蛋白提取液与 C57-BMSC 共培养 3 d 后，这几个蛋白的表达明显升高，说明 C57-BMSC 又向更多能的干细胞分化了，见图 1.

2. 2 TS-UC-MSC 有 1 个蛋白发生了统计学意义的改变 BMPR-1A 是干细胞多能性的标志，TS-UC-MSC 用 50% 鸡蛋白提取液共培养 3 d 后，与未加鸡蛋白提取液培养的细胞相比，BMPR-1A 明显升高，说明细胞又向多能干细胞的方向分化了，见图 2.

2. 3 293T 有 1 个蛋白发生了统计学意义的改变BMPR-1A 是干细胞多能性的标志，293T 细胞是标准的体细胞株，用50%鸡蛋白提取液共培养3 d 后，BMPR-1A 表达明显升高，说明 293T 细胞有向干细胞转变的现象发生，见图 3.

2. 4 293T-GFP 有 1 个蛋白发生了统计学意义的改变 OCT4 是干细胞多能性的标志，293T-GFP 用50% 的鸡蛋白提取液共培养后，对比培养基培养的细胞 OCT4 的表达明显增加，说明细胞有向干细胞转化的现象。

2. 5 293T 细胞 OCT4 和 NANOG 蛋白的 Westernblot 结果（图 5） OCT4 和 NANOG 蛋白是干细胞多能性的标志，293T 细胞用50%的鸡蛋白提取液共培养后，OCT4 和 NANOG 蛋白的表达量明显增加（图5 和表 1） ,与对照组（培养基培养）相比有统计学意义（ P<0. 05,n =3） .

3 讨论

SOX17、BMPR-1A、NANOG 和 OCT4 是干细胞中表达的蛋白，在细胞转化为多能的干细胞时，这几个蛋白的表达明显升高。因此，这些蛋白在细胞中表达明显升高时，可以认为细胞向多能的干细胞发生了转化。我们用共培养法发现加了 50% 鸡蛋白提取液的细胞有一些干细胞蛋白表达明显升高，而现在用卵细胞提取液诱导体细胞核重编程的方法，通常用可逆渗透法，即先用链球菌溶血素 O（ SLO）在细胞膜上打孔，再用卵细胞提取液渗透，最后再用氯化钙再封合细胞膜上的孔，是否这种方法诱导效率更高，需要今后的实验进一步深入研究。

我们在实验中用了 4 种细胞，C57 小鼠的骨髓间充质干细胞（ C57-BMSC）、树鼩的脐带间充质干细胞（ TS-UC-MSC）、293T 细胞（购自中国科学院昆明细胞库）和 GFP 慢病毒转染成功的 293T 细胞（ 293T-GFP） ,用 50% 的鸡蛋白提取液共培养 3 d后，均检测到了干细胞相关蛋白表达的升高，说明了鸡蛋白提取液有诱导细胞向多能干细胞转变的现象，因为多能标志蛋白有意义地升高了。

对比猪卵提取液和蟾蜍卵提取液，鸡蛋白提取液获取更方便，获取量更大，提取过程注意无菌操作，获得的鸡蛋白提取液无须过滤除菌就可用于细胞培养，有较大的应用价值。在我们以前的研究中，发现鸡蛋白提取液有促细胞增殖的作用[4,5],还有促进多能因子 OCT4 和 NANOG 升高表达的作用[6,7],因此在本研究中我们进一步应用干细胞蛋白芯片检测更多的多能因子，同时使用 4 种细胞，都检测到其中多能因子的升高表达，C57-BMSC 有SOX17、BMPR-1A 和 NANOG 这 3 个蛋白发生了统计学意义的改变，TS-UC-MSC 有 BMPR-1A 蛋白发生了统计学意义的改变，293T 有 BMPR-1A 蛋白发生了统计学意义的改变，293T-GFP 有 OCT4 蛋白发生了统计学意义的改变，进一步验证了鸡蛋白提取液有诱导体细胞向多能细胞转变的作用。

由于 C57-BMSC 和 TS-UC-MSC 是间充质干细胞，它们经过诱导后多能因子进一步升高表达，是否证明了鸡蛋白提取液含有某些逆向分化细胞的特殊物质，以及这些物质的鉴定和分离提取还有待实验进一步验证。

参考文献：

[1] Miyamoto K,Tsukiyama T,Yang Y,et al. Cell-free extracts frommammalian oocytes partially induce nuclear reprogramming in so-matic cells[J]. Biol Reprod,,80（ 5） : 935-943.

[2] Hansis C,Barreto G,Maltry N,et al. Nuclear reprogramming of hu-man somatic cells by xenopus egg extract requires BRG1[J]. CurrBiol,,14（ 16） : 1475-1480.

[3] Miyamoto K,Furusawa T,Ohnuki M,et al. Reprogramming eventsof mammalian somatic cells induced by Xenopus laevis egg extracts[J]. Mol Reprod Dev,,74（ 10） : 1268-1277.

[4] 阮光萍，王金祥，刘菊芬，等 . 鸡卵清提取液中小于 3kDa 的成分有促细胞增殖的作用[J]. 中国细胞生物学学报，,36（ 10） : 1350-1354.

[5] 阮光萍，王金祥，庞荣清，等 . 鸡卵细胞提取液有维持和增强细胞活性的关键作用[J]. 中国细胞生物学学报，,35（ 6） : 804-809.

[6] 阮光萍，王金祥，姚翔，等 . 鸡卵提取物促进 293T 细胞升高表达多能基因 OCT4 和 NANOG[J]. 中国细胞生物学学报，2014,36（ 2） : 190-194.

[7] 阮光萍，姚翔，刘菊芬，等 . 鸡卵清提取液中大于 3ku 蛋白促细胞升高表达多能基因 Oct-3/4 和 Nanog[J]. 中国组织工程研究，2014,18（ 37） : 6029-6033.