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篇1：人工合成草鱼生长激素cDNA在大肠杆菌中的表达
人工合成草鱼生长激素cDNA在大肠杆菌中的表达
经密码子优化的人工合成草鱼生长激素cDNA与表达载体pET-28a(+)重组，构建重组表达质粒pET-GH。转化大肠杆菌BL21(DE3)，筛选阳性克隆，IPTG诱导表达。12.5％的SDS-PAGE分析显示，大肠杆菌表达产物中含有与草鱼生长激素分子量一致的`新增蛋白带，激光密度扫描，其产量约占菌体总蛋白的40％。金属离子螯合层析柱亲和纯化，获得电泳纯的重组蛋白。Western-blotting和酶联免疫吸附受体法检测证实：重组蛋白与抗草鱼生长激素的多克隆抗体发生特异性结合；复性后的重组蛋白有与天然草鱼生长激素一致的生物学活性。
作 者：王伟 汪亚平朱作言 WANG Wei WANG Ya-Ping ZHU Zuo-Yan 作者单位：中国科学院水生生物研究所, 刊 名：遗传学报 ISTIC SCI PKU英文刊名：ACTA CENETICA SINICA 年，卷(期)： 28(4) 分类号：Q95 关键词：草鱼生长激素 原核表达 纯化 酶联免疫吸附受体检测篇2：草鱼生长激素基因在毕赤酵母中的表达
草鱼生长激素基因在毕赤酵母中的表达
将草鱼生长激素基因(cGH)的cDNA亚克隆到酵母表达载体pPIC9K中, 经电击转化导入毕赤巴斯德酵母GS115菌株,获得转化子.菌落PCR技术筛选证实cGH已经整合到了酵母染色体上.对重组酵母进行诱导表达, SDS-PAGE和Western印迹分析,结果表明cGH在毕赤巴斯德酵母GS115菌株中获得了高效表达.
作 者：孟亚鹏 徐敏 代焕梅 丁秀琼 张海英 殷雪 刘世贵 龙章富 MENG Ya-peng XU Min DAI Huan-mei DING Xiu-qiong ZHANG Hai-ying YIN Xue LIU Shi-gui LONG Zhang-fu 作者单位：孟亚鹏,徐敏,代焕梅,丁秀琼,张海英,殷雪,MENG Ya-peng,XU Min,DAI Huan-mei,DING Xiu-qiong,ZHANG Hai-ying,YIN Xue(四川大学生命科学学院,成都,610064)刘世贵,龙章富,LIU Shi-gui,LONG Zhang-fu(四川大学生命科学学院,成都,610064;成都川大创新生物技术研究所)
刊 名：四川动物 ISTIC PKU英文刊名：SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY 年，卷(期)： 25(1) 分类号：Q959.4 TQ926 关键词：草鱼 生长激素基因 pPIC9K表达载体 毕赤酵母 高效表达篇3：八肋游仆虫γ微管蛋白cDNA序列及其在大肠杆菌中的表达
八肋游仆虫γ微管蛋白cDNA序列及其在大肠杆菌中的表达
提取八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)的mRNA,采用RT-PCR技术对其γ微管蛋白基因的'cDNA序列进行了分析.结果表明八肋游仆虫的微管蛋白编码基因至少使用4个转录起始位点, 分别位于起始密码子前的32、29、24和20bp处;该基因同时也有至少4多聚腺苷酸加尾位点,分别位于终止密码子后的21、23、29和32 bp处.由于多个转录起始位点和多聚腺苷酸加尾位点的存在,对应的mRNA长度在1427～1450 核苷酸之间.此外,本研究对该基因中编码半胱氨酸的TGA密码子进行定点突变,然后在大肠杆菌中进行异体表达, SDS-PAGE分析表明表达产物为92kDa的γ微管蛋白融合蛋白.
作 者：谭明 梁爱华 Tan Ming Liang Aihua 作者单位：谭明,Tan Ming(中山大学生物系,广州,510275)梁爱华,Liang Aihua(山西大学生物工程室,太原,030006)
刊 名：高技术通讯 ISTIC EI PKU英文刊名：HIGH TECHNOLOGY LETTERS 年，卷(期)： 10(4) 分类号：Q3 关键词：纤毛虫 游仆虫 融合表达 转录起始位点 加多聚腺苷酸位点篇4：人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达
人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的:扩增人lrp-cDNA全长编码区、并在大肠杆菌中表达和鉴定.方法:提取脂多糖刺激后HEK293细胞的`总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出全长人lrp序列,将其克隆入原核表达载体pcTAT后转化大肠杆菌诱导表达,做SDS-PAGE分析;并用免疫印迹法鉴定6His-TAT-LRG融合蛋白表达.结果:测序结果表明,获得了全长人lrp-cDNA全长编码区,其序列与GenBank已经公布的不完全一致;SDS-PAGE分析表明,6His-TAT-Lrp融合蛋白在大肠杆菌中成功表达,表达量约占菌体总蛋白的17%;免疫印迹法鉴定显示,该融合蛋白可与相应抗血清产生阳性反应.结论:得到人lrp-cDNA全长编码区序列,并成功表达,为人lrp功能的深入研究奠定了基础.
作 者：宋庆贺 柴玉波 陈苏民 陈南春 黄勇 代忠明 SONG Qing-He CHAI Yu-Bo CHEN Su-Min CHEN Nan-Chun HUANG Yong DAI Zhong-Ming 作者单位：第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033 刊 名：第四军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 27(5) 分类号：Q78 关键词：脂多糖 应答基因 逆转录聚合酶链反应 基因表达篇5：木薯醇腈酶(HNL)cDNA在大肠杆菌中高效表达的初步研究
木薯醇腈酶(HNL)cDNA在大肠杆菌中高效表达的初步研究
将编码木薯醇腈酶(HNL)cDNA克隆到原核表达载体pBV220,构建了大肠杆菌(Escherichia coli)中表达质粒 pBV220-HNL.含重组质粒pBV220-HNL的.大肠杆菌DH5α菌株经温度诱导后,其表达产物以包涵体形式存在.SDS-PAGE分析及酶活测定的结果表明木薯HNL cDNA在大肠杆菌中成功表达.
作 者：王丹 万洁 李维 高勇 WANG Dan WAN Jie LI Wei GAO Yong 作者单位：王丹,WANG Dan(成都医学院,医学检验系,四川,成都,610083)万洁,李维,高勇,WAN Jie,LI Wei,GAO Yong(四川师范大学,生命科学学院,四川,成都,610066)
刊 名：四川师范大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SICHUAN NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE) 年，卷(期)：2006 29(3) 分类号：Q786 关键词：醇腈酶cDNA 温度诱导 包涵体篇6：烟实夜蛾触角化学感受蛋白cDNA的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达
烟实夜蛾触角化学感受蛋白cDNA的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达
利用RT-PCR技术扩增了编码烟实夜蛾Helicoverpa assulta触角化学感受蛋白(chemosensory protein)的全长cDNA.克隆和测序结果表明,烟实夜蛾化学感受蛋白基因核苷酸序列全长384bp(GenBank序列号:DQ285667),编码127个氨基酸残基,预测N-末端包含16个氨基酸组成的信号肽序列,因此估测其成熟蛋白分子量为12.97kD,等电点为5.32.将该基因重组到表达载体pGEX-4T2中,并转入原核细胞中进行表达.SDS-PAGE和Westem印迹分析表明,经IPTG诱导后,烟实夜蛾化学感受蛋白基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条约39 kD的外源蛋白,与预测的`融合蛋白分子量大小相符.
作 者：蒋金炜 高素霞 安世恒 王琛柱 JIANG Jin-Wei GAO Su-Xia AN Shi-Heng WANG Chen-Zhu 作者单位：蒋金炜,高素霞,安世恒,JIANG Jin-Wei,GAO Su-Xia,AN Shi-Heng(河南农业大学植物保护学院,郑州,450002)王琛柱,WANG Chen-Zhu(中国科学院动物研究所,农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室,北京,100080)
刊 名：昆虫学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ENTOMOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 49(5) 分类号：Q966 关键词：烟实夜蛾 化学感受蛋白 基因克隆 测序 原核表达篇7：葛仙米中SOD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
葛仙米中SOD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
采用PCR技术从葛仙米(Nostoc sphaeroides)总DNA中克隆了一段基因序列,该序列与基因库中已公布的编码普通念珠藻(Nostoc commnue)超氧化物歧化酶的氨基酸序列同源性为98%.将该基因插入含,T7启动子的质粒pET-32a(+)中构建表达质粒pET-sod,然后将该表达质粒转入大肠杆菌BL21中进行蛋白表达,表达菌株用1mmol/L IPTG诱导表达数小时后,产生较多重组的蛋白,且该蛋白以可溶性蛋白形式存在.SDS-PAGE分析表明:在相对分子量约为22kd的`位置有一条明显蛋白质带.将诱导表达后的蛋白通过亲和层析的方法进行蛋白纯化;NBT光还原法测定表达产物的比活力,每毫克纯化蛋白约为2550U.
作 者：汪滢 章秀 吴双秀 王全喜 WANG Ying ZHANG Xiu WU Shuang-xiu WANG Quan-xi 作者单位：上海师范大学生命与环境科学学院,上海,34 刊 名：上海师范大学学报（自然科学版） ISTIC英文刊名：JOURNAL OF SHANGHAI NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES) 年，卷(期)： 37(3) 分类号：Q785 Q949.22 关键词：葛仙米 SOD基因克隆 诱导表达篇8：Barnase在大肠杆菌中的分泌表达和诱导条件优化
Barnase在大肠杆菌中的分泌表达和诱导条件优化
从解淀粉芽孢杆菌中PCR分别扩增解淀粉芽孢杆菌核糖核酸酶barnase基因及其抑制刑barstar基因,采用将barnase基因置于barstar基因保护下的`克隆策略,以pET-22b(+)质粒为基础,构建大肠杆茵分泌型表达质粒.IPTG诱导表达目的蛋白后将培养基蛋白进行SDS-PAGE分析并从诱导温度、IPTG诱导浓度和诱导时间三方面初步优化诱导表达条件.
作 者：林中叶 谢友坪 敬科举 凌雪萍 卢英华 LIN Zhong-ye XIE You-ping JING Ke-ju LING Xue-ping LU Ying-hua 作者单位：林中叶,谢友坪,敬科举,凌雪萍,LIN Zhong-ye,XIE You-ping,JING Ke-ju,LING Xue-ping(厦门大学化学化工学院化学工程与生物工程学系,中国福建,厦门,361005)卢英华,LU Ying-hua(厦门大学化学化工学院化学工程与生物工程学系,中国福建,厦门,361005;厦门大学化学化工学院福建省化学生物学重点实验室,中国福建,厦门,361005)
刊 名：生命科学研究 ISTIC英文刊名：LIFE SCIENCE RESEARCH 年，卷(期)：2008 12(3) 分类号：Q939.97 关键词：barnase基因 barstar基因 大肠杆菌 分泌表达★ 生物技术论文
★ 基因工程论文
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