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篇1：抗牛型结核分支杆菌单克隆抗体的制备和鉴定
抗牛型结核分支杆菌单克隆抗体的制备和鉴定
运用杂交瘤细胞技术,以牛型结核分支杆菌免疫Balb/c小鼠,用其超声波裂解液筛选杂交瘤细胞,得到了2株能稳定分泌抗牛型结核杆菌抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5D4和4C3,并对它们的特性作了初步鉴定.经鉴定,2株单克隆抗体均为IgG1 亚类.腹水经ELISA检测,效价可达1∶1×104～1∶1×105,同时分析了2株单抗的抗原位点,结果表明2株单抗针对不同的`抗原位点.单抗的特异性试验结果显示,2株单抗与大肠杆菌,沙门氏菌,金黄色葡萄球菌等均没有反应,但都与人型结核分支杆菌有不同程度的交叉反应.并应用免疫胶体金技术制备牛结核杆菌胶体金快速诊断试纸条做应用性鉴定.该试纸条只与结核杆菌发生反应,而不与沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、李氏杆菌等发生交叉反应.该试纸条最低能检测出浓度为1×106个/mL的牛结核杆菌菌液,有较高的灵敏度.
作 者：朱德全 杜惠芬 李克生 余四九 ZHU De-quan DU Hui-fen LI Ke-sheng YU Si-jiu 作者单位：朱德全,余四九,ZHU De-quan,YU Si-jiu(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070)杜惠芬,李克生,DU Hui-fen,LI Ke-sheng(甘肃兰州雅华生物技术有限公司,甘肃,兰州,730030)
刊 名：甘肃农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 41(5) 分类号：Q785 关键词：牛型结核分支杆菌 单克隆抗体 制备 鉴定篇2：抗幽门螺杆菌单克隆抗体的制备与鉴定
抗幽门螺杆菌单克隆抗体的制备与鉴定
目的制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)全菌的单克隆抗体并对其特异性进行初步鉴定.方法用培养的`幽门螺杆菌超声破菌后的上清和沉淀为抗原分别免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体并测定抗体免疫球蛋白亚类、效价及亲和力,用重组表达的Hp Lpp20、HspA、urease A、CagA、urease B、catalase蛋白鉴定抗体.结果共获得34株抗Hp的单克隆抗体,其中抗上清31株和抗沉淀3株,34株抗体中针对Lpp20、HspA、urease A、CagA、ureaseB、catalase蛋白的抗体分别为3、2、4、1、5、2株,目前已鉴定的部分单克隆抗体的亚类均为IgG1,细胞培养上清的效价为1:16～1:32,腹水效价为1:3～1:64000,抗体亲和常数介于1×10-10 mol/L～5.2×10-12mol/L.结论获得特异性针对幽门螺杆菌的单克隆抗体,为幽门螺杆菌的诊断和疫苗研究奠定基础.
作 者：李妍 宁云山 洪燕华 刘宜楚 罗军 龙敏 董文其 李明 LI Yan NING Yun-shan HONG Yan-hua LIU Yi-chu LUO Jun LONG Min DONG Wen-qi LI Ming 作者单位：李妍,宁云山,洪燕华,刘宜楚,董文其,李明,LI Yan,NING Yun-shan,HONG Yan-hua,LIU Yi-chu,DONG Wen-qi,LI Ming(南方医科大学,生物技术学院,广东,广州,510515)罗军,龙敏,LUO Jun,LONG Min(南方医科大学,公共卫生与热带病学院微生物系,广东,广州,510515)
刊 名：南方医科大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 26(4) 分类号：Q813.2 关键词：幽门螺杆菌 单克隆抗体 疫苗 杂交瘤技术篇3：抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定
抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定
以重氮反应将盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白偶联制备免疫原和检测原,通过杂交瘤技术获得了3株能分泌特异结合CL小分子的抗体杂交瘤细胞株.经竞争法ELISA分析,9E3抗体的IC50质量浓度为19.85μg/L,14C5抗体为1.65μg/L,16F4抗体为0.84μg/L.在与类似物的交叉性反应中,16F4抗体与沙丁胺醇的交叉反应性为0.26%,特布他林为0.04%,与非诺特罗、肾上腺素、去甲肾上腺素的.交叉反应性都小于0.02%.因此,所制备的抗盐酸克伦特罗的抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.
作 者：吕琦 张爱玲 王泽华 马岚 LV Qi ZHANG Ai-ling WANG Ze-hua MA Lan 作者单位：吕琦,王泽华,马岚,LV Qi,WANG Ze-hua,MA Lan(云南大学,单克隆抗体工程技术中心,云南,昆明,650091)张爱玲,ZHANG Ai-ling(云南中医学院,云南,昆明,650032)
刊 名：云南大学学报（自然科学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF YUNNAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES EDITION) 年，卷(期)： 28(1) 分类号：Q813.2 关键词：盐酸克伦特罗 单克隆抗体 竞争法ELISA β-激动剂 残留篇4：牛干扰素单克隆抗体的制备与初步鉴定
牛干扰素单克隆抗体的制备与初步鉴定
通过IPTG诱导的`大肠埃希菌表达重组牛干扰素-γ融合蛋白(BovIFN-γ),利用Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱进行融合蛋白的纯化,纯化后的融合蛋白BovIFN-γ作为抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA筛选,有限稀释法克隆亚克隆获得分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、亚类及稳定性进行鉴定.获得一株稳定分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株A12E9,细胞培养上清和腹水效价可达1∶3 200和1∶160 000.
作 者：李超 林祥梅 余多慰 李全芬 李桂芬 韩雪清 作者单位：李超,余多慰,李全芬(南京师范大学生命科学学院,江苏南京,210046)林祥梅,李桂芬,韩雪清(中国检验检疫科学研究院,北京,100029)
刊 名：动物医学进展 PKU英文刊名：PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 31(4) 分类号：S852.43 关键词：牛γ干扰素 单克隆抗体 鉴定篇5：抗IBDV VP2单克隆抗体制备及其免疫学鉴定
抗IBDV VP2单克隆抗体制备及其免疫学鉴定
采用不连续蔗糖密度梯度离心法纯化的鸡传染性法氏囊病病毒弱毒Gt株,并与Tj强毒株共同免疫BALB/c小鼠.利用淋巴细胞杂交瘤技术,取其脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞进行融合, 经过3次筛选克隆, 获得8株具有分泌抗IBDV抗体的杂交瘤细胞系,并对8株单抗进行了分子生物学及免疫学方面的鉴定.间接ELISA显示获得的'8株单抗只与IBDV有特异性的反应,Western-blotting表明,部分单抗能够特异地与Sf9细胞表达的VP2蛋白反应;中和试验表明8株单抗均具有中和活性,而且有3株中和效价在26以上.研究推测,8株单抗中有2株针对的表位为构象依赖性,其余6株单抗所针对的为线性中和性表位.
作 者：程宇 高宏雷 高玉龙 简子健 余嘉玲 王晓燕 王笑梅 CHENG Yu GAO Hong-lei GAO Yu-long JIAN Zi-jian YU Jia-ling WANG Xiao-yan WANG Xiao-mei 作者单位：程宇,CHENG Yu(中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001;新疆农业大学,动物医学院,乌鲁木齐,830052)高宏雷,高玉龙,王晓燕,王笑梅,GAO Hong-lei,GAO Yu-long,WANG Xiao-yan,WANG Xiao-mei(中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001)
简子健,余嘉玲,JIAN Zi-jian,YU Jia-ling(新疆农业大学,动物医学院,乌鲁木齐,830052)
刊 名：新疆农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF XINJIANG AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 29(2) 分类号：Q785 关键词：传染性法氏囊病病毒 单克隆抗体 中和活性篇6：应用膜反向斑点杂交技术检测耐异烟肼结核分支杆菌基因型
应用膜反向斑点杂交技术检测耐异烟肼结核分支杆菌基因型
目的 应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对异烟肼(INH)耐药性.方法 设计与合成用于检测结核分支杆菌耐INH kat、inhA基因的.寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分枝杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交.结果 20株INH敏感株中,仅9例出现野生型探针K1阳性杂交,余11株中,10株K1b'杂交阳性,PCR-DS显示KatG基因315位密码子AGC→ACC,1株K1c'杂交阳性,PCR-DS显示KatG基因315位密码子AGC→ACC;15株出现野生型探针inh1阳性杂交,另5株Inhal探针杂交阳性,PCR-DS显示inhA基因-15位C→T突变.36株耐药株中,17株K1探针杂交阳性,18株K1b'杂交阳性,1株与所试探针不杂交,PCR-DS显示KatG基因279位密码子GGC→GAC;11株与突变型Inhal探针阳性杂交,25株野生型探针inhl杂交阳性.KatG基因膜杂交突变检出率为50%,inhA基因膜杂交突变检出率为30.56%.结论 膜反向斑点杂交技术可成为检测部分结核分支杆菌耐异烟肼基因型简便、快速的方法.
作 者：梁建琴 吴雪琼 张俊仙 李洪敏 陆阳 LIANG Jian-qin WU Xue-qiong ZHANG Jun-xian LI Hong-min LU Yang 作者单位：北京解放军309医院,结核病研究室,北京,100091 刊 名：中国现代医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA JOURNAL OF MODERN MEDICINE 年，卷(期)：2006 16(15) 分类号：Q789 关键词：结核分支杆菌 异烟肼 KatG inhA 药物耐受性 聚合酶链反应 反向斑点杂交篇7：抗双氯青霉素单克隆抗体的制备与初步鉴定
抗双氯青霉素单克隆抗体的制备与初步鉴定
采用碳化二亚胺法,将双氯青霉素(dicloxacillin)与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的`脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆,获得1株可稳定分泌McAb的杂交瘤细胞5D4-C9-C8;间接ELISA方法测定,其细胞上清抗体效价为1:300,腹水效价为1:3.5×105,为IgG1,与其结构类似物邻氯青霉素、苯唑青霉素的交叉反应率分别为17.6%和26.1%,与苄青霉素、羟氨苄青霉素和氨苄青霉素均无交叉反应性.体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定.为进一步研制检测双氯青霉素的ELISA试剂盒奠定了基础.
作 者：王琳 齐孟文 冯才伟 孟丽丽 WANG Lin QI Meng-wen FENG Cai-wei MENG Li-li 作者单位：中国农业大学,北京,100094 刊 名：中国预防兽医学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 28(5) 分类号：Q819 关键词：β-内酰胺抗生素 双氯青霉素 单克隆抗体篇8：抗果蝇Trio蛋白抗体的制备及鉴定
抗果蝇Trio蛋白抗体的制备及鉴定
目的:制备兔抗果蝇Trio蛋白的抗体.方法:以RT-PCR扩增Trio的1 173 bp的基因片段并克隆入pET28a(+) 和pGEX-4T-1 (His)6C表达载体中,表达并纯化Trio-His、Trio-GST融合蛋白.用纯化的Trio-His融合蛋白免疫家兔产生抗Trio的抗体,用Trio-GST亲和层析法进行纯化并采用Western blot法检测抗体生物学活性.结果:表达的Trio-His蛋白以包涵体的形式存在,用His亲和层析法分离纯化后得到较纯的Trio-His融合蛋白,以纯化的Trio-His免疫家兔制备的兔抗Trio的'抗体,经Western blot分析显示该抗体可与果蝇S2细胞Trio特异性结合.结论:获得具有良好特异性的兔抗Trio抗体,为进一步研究Trio的功能奠定了基础.
作 者：缪峰 吕雯雯 丁洁 袁榴娣 MIAO Feng Lü Wen-wen DING Jie YUAN Liu-di 作者单位：东南大学,发育与疾病相关基因教育部重点实验室,江苏,南京,210009 刊 名：东南大学学报（医学版） ISTIC英文刊名：JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 27(4) 分类号：Q786 关键词：Trio基因 原核表达 抗体制备篇9：牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化
牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化
从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T SimpleVector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化.经测序,构建的`克隆质粒pMD-MPT83与GenBank中的序列一致;构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamH Ⅰ+HindⅢ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,4 h后表达量即达到高峰;Westernblotting分析表明,融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带.表明MPT83基因原核表达载体构建成功.
作 者：鲁俊鹏 罗满林 宋延华 邹潍力 LU Jun-peng LUO Man-lin SONG Yan-hua ZOU Wei-li 作者单位：鲁俊鹏,罗满林,邹潍力,LU Jun-peng,LUO Man-lin,ZOU Wei-li(华南农业大学,兽医学院,广东,广州,510642)宋延华,SONG Yan-hua(广东温氏食品集团有限公司,广东,新兴,527439)
刊 名：中国兽医科学 ISTIC PKU英文刊名：VETERINARY SCIENCE IN CHINA 年，卷(期)： 36(5) 分类号：S852.618 Q786 关键词：牛分支杆菌 MPT83基因 克隆 原核表达 蛋白纯化篇10：抗HBsAg单链抗体特异性单克隆抗体的制备及应用
抗HBsAg单链抗体特异性单克隆抗体的制备及应用
目的 获得抗HBsAg单链抗体 (HBScFv)的单克隆抗体,并初步研究其在抗HBsAg类小分子抗体及其融合蛋白质的纯化、活性鉴定方面的应用.方法 利用杂交瘤技术,以大肠杆菌表达的重组抗HBScFv为抗原,免疫Balb/c小鼠,再将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合.通过ELISA法、Western-blot鉴定特异性单克隆抗体,通过免疫双扩散法鉴定单抗亚型,并将筛选到的高效价单抗用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及ELISA鉴定.结果 建立了9株能够稳定分泌抗HBScFv特异性单克隆抗体的'细胞株,其细胞上清效价为1:160～1:12 800,腹水效价为1:50 000～1:400 000;单克隆抗体的亚类分析结果显示有6株为IgG1,其余3株为IgG2a.初步应用结果 表明制备的单克隆抗体14F7可用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及活性鉴定.结论 成功建立了能够稳定分泌HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株.
作 者：陈文吟 饶桂荣 任向荣 郑业华 粟宽源 CHEN Wen-yin RAO Gui-rong REN Xiang-rong ZHENG Ye-hua SU Kuan-yuan 作者单位：空军广州医院,肝病研究所,广东,广州,510602 刊 名：中国生化药物杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS 年，卷(期)：2006 27(5) 分类号：Q785 关键词：抗HBsAg单链抗体 单克隆抗体 制备★ 检验鉴定考试题
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